本发明公开了一种高效生产琥珀酸的重组大肠杆菌及其构建方法。本发明敲除E.coli FMME‑N‑2产琥珀酸菌株的副产物编码基因得到菌株E.coli FMME‑N‑5（ΔfocA‑pflB‑ΔldhA‑Δpta‑ackA）；过表达来自产琥珀酸放线杆菌磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶pck和施式芽孢杆菌亚磷酸酯脱氢酶ptxD，筛选获得高效生产琥珀酸的工程菌；此工程菌株在7.5L发酵罐上采用两阶段发酵策略，发酵96 h，琥珀酸产量达到了137 g/L,琥珀酸得率达到1 g/g葡萄糖、生产强度为1.43 g/L/h，副产物乳酸、甲酸不积累，乙酸1‑2 g/L，具有一定的工业化生产潜力。