本发明公开了一种DNA/Fe3O4网状结构结合磁性三相萃取法的核酸检测方法，包括以下步骤：(1)制备Fe3O4纳米片；(2)在Fe3O4纳米片上修饰单链DNA得到Fe3O4/ssDNA；(3)制备超支化DNA结构样品，将超支化DNA结构样品与Fe3O4/ssDNA混合反应，得到DNA/Fe3O4网状结构；(4)将DNA/Fe3O4网状结构所在体系作为水相，和有机相混合，将带有萃取液滴的磁性棒浸入有机相，萃取DNA/Fe3O4网状结构后取出，利用紫外‑可见光谱仪对发生催化显色反应的液滴进行监测，分析紫外‑可见光谱数据即得待测样品中目标核酸的含量。该方法大大降低了核酸的检出限，实用性高，对于microRNA‑122的检出限低至0.147aM，对H‑DNA的检出限低至0.34aM，线性范围分别为0.5aM至1pM以及1aM至1pM(r2>0.995)，利用单滴微萃取技术，检测效率高，操作简单，成本低。