一种异戊烯基转移酶胞外催化制备维生素K2的方法，包括下列步骤：步骤1：对含有NovQ表达菌株的菌液进行超声波处理，然后离心收集上清液得到细胞破碎液；步骤2：将第一反应底物、第二反应底物、MgCl2和细胞破碎液混合得到反应体系；所述第一反应底物为甲萘醌和甲萘醌氢醌中的至少一种，所述第二反应底物是异戊二烯焦磷酸和牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸中的至少一种；步骤3：将反应体系置于氮气气氛下，然后在20‑40℃条件下进行反应，反应结束后，将反应液冻干，然后用甲醇萃取，萃取液离心后取上清液，上清液即含有纯化的维生素K2。本发明利用细胞破碎液实现了体外催化合成维生素K2，该法操作简单，排除了全细胞催化过程中的竞争性抑制等不利因素。