本发明公开了一种基于深度学习的斑马鱼空间姿态与心脏位置估计方法，涉及图像识别处理领域，该方法包括：获取斑马鱼幼鱼采样图像制作数据集，对斑马鱼幼鱼采样图像进行关键点标注，构建多层卷积神经网络训练数据集并进一步计算，达到自动化识别在显微镜视野中斑马鱼幼鱼的姿态，通过帧差法对斑马鱼待测图像进行逐帧比较，通过检测斑马鱼心脏的细微变化，得到斑马鱼心脏的具体位置。该方法成本较低，操作简单，能够有效提高准确率，解决了传统注射方法中由操作人员人为判断引起的操作误差。