本发明公开了一种羔绵羊睾丸支持细胞及其分离方法和应用，其中，所述羔绵羊睾丸支持细胞SCST的保藏编号为CCTCC No.C2019203。本发明的SCST细胞可直接用于羊口疮病毒的规模化繁殖；也可转染端粒酶基因使其永生化，然后进行压力粗筛、压力分种以及持续传代，得到亚克隆细胞系，将该亚克隆细胞系用于羊口疮病毒的规模化繁殖。所述亚克隆细胞系可以用含国产血清的培养基培养，降低了生产成本，适合规模化生产应用。本发明提供的亚克隆细胞系与常规原代细胞相比，能够明显提高羊口疮病毒的分离率，且羊口疮病毒的致病变时间明显缩短、分离病毒的拷贝数比原代细胞提高100倍以上，可以为羊口疮病毒的规模化繁殖及病毒感染致病机制研究提供工具。