本发明公开了一种虎奶菇细胞壁糖蛋白的提取方法，属于生物技术领域。本发明通过将干燥的或新鲜的虎奶菇菌核粉碎、PBS清洗、去垢剂‑还原剂混合溶液浸提、三氯乙酸沉淀、丙酮清洗、透析得到虎奶菇菌核细胞壁糖蛋白，所得糖蛋白占菌核细胞壁干重的4.93～5.36％，糖蛋白中总糖含量约为32％，总蛋白含量约为67％，无游离多糖和大分子蛋白质的残留。再经过柱分离可以得到不同分子量大小的糖蛋白纯品。本发明所采用的方法工艺简单，操作性强，易于实现，纯度较高，具有广阔的工业应用前景。