本发明公开了一种用于检测烟草eIF4E1基因SNP突变位点的Bi‑PASA标记引物及检测方法，外引物P的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，外引物Q的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，内引物A的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，内引物B的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，上述引物序列中小写字母碱基为引入的错配碱基。采用本发明的四个引物，结合一次PCR和电泳，便可以准确地检测出eIF4E1基因SNP突变位点回交转育过程中回交和自交后代的基因型，提高分子标记辅助轮回选择效率，加快育种进程。