本发明构建了一种恩诺沙星的均相快速检测方法，首先筛选得到一条高特异性的恩诺沙星适配体，然后通过合理的碱基互补配对设计，使其形成稳定的发卡结构。当靶标存在时与发卡适配体结合，发生构象改变，最终通过发卡适配体荧光基团的距离变化引起的荧光能量传递实现恩诺沙星的快速检测。即靶标不存在时荧光处于猝灭状态，而靶标存在时能够恢复荧光。本方法具有高灵敏度、高特异性，且快速简便，在6 min内即可实现对恩诺沙星的定量检测，并将特异性识别和定量信号输出合二为一，有效解决了传感器制备复杂、测定时间长的难题。