本发明公开了一种CHO细胞基因NW_003614889.1内稳定表达蛋白质的位点及其应用，本发明获得的稳定表达位点位于CHO细胞基因NW_003614889.1的第103431碱基处上下游100bp范围内碱基，即第103331‑103531碱基处，可整合外源蛋白质基因并进行稳定表达。本发明通过定点整合的方式将目的基因定点整合到上述稳定表达区域，解决了随机整合所带来的整合位点不明确的问题；本发明通过CHO基因组内稳定表达位点NW_003614889.1的第103431碱基处上下游103331‑103531碱基范围内定点整合外源基因克服了位置效应所带来的表达不稳定性以及反复繁琐的细胞株筛选过程。