本发明提供一种环(酪氨酸‑缬氨酸)的制备方法，其特征是：采用如下步骤：步骤A：以黄水为原料制备原料萃提液；步骤B：将经步骤A制得的原料萃提液进行减压蒸馏，制得环(酪氨酸‑缬氨酸)粗提物；步骤C：将经步骤B制得的环(酪氨酸‑缬氨酸)粗提物用乙醇和水稀释得稀释液，用树脂柱将所述稀释液进行层析得层析液，对所述层析液进行浓缩，制得环(酪氨酸‑缬氨酸)粗品；步骤D：将经步骤C制得的环(酪氨酸‑缬氨酸)粗品进行反相柱分离得分离液，对所述分离液进行浓缩、结晶，制得环(酪氨酸‑缬氨酸)纯品。本发明原料易得，方法简便，产物纯度在95％以上，可为黄水中其他肽类化合物的分离制备提供技术依据。