本发明公开了转录因子Tbx20启动子区G4调控元件在害虫防治中的应用，所述转录因子Tbx20启动子区G4调控元件的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明公开了转录因子Tbx20启动子区G4调控元件在害虫防治中的应用，通过靶标基因筛选并结合CRISPR/Cas9技术敲除Tbx20启动子区的G4调控元件，得到Tbx20‑G4突变体，将其进行表型及遗传性能测定，发现Tbx20启动子区的G4敲除后严重影响害虫孵化率，羽化率：同时可导致幼虫期大量死亡，可有效用于害虫防治。