本发明公开一种用于同时检测多种磺胺类抗生素抗性基因的光热侧流分析装置及应用，该装置包括试纸条、n种光热捕获探针、面激光光源和热检测器件，通过在Fe3O4‑PDA‑Au复合材料表面分别吸附n种待测抗性基因捕获序列和质控探针互补序列制得n种光热捕获探针，n≥2；试纸条上n个检测区依次固定n种待测抗性基因检测探针，在质控区上固定质控探针。将n种光热捕获探针、待测样品液、缓冲液混合，将试纸条样品垫端插入混合液中进行层析，以面激光照射整个检测区并以热成像或测温设备采集检测区光热温度，根据温度与n种待测抗性基因浓度分别建立工作曲线，进行n种目标物的光热定性和定量分析。