本申请提供MMLV逆转录酶突变体及其应用，涉及生物技术领域，该MMLV逆转录酶突变体在全长为671个氨基酸的野生型MMLV逆转录酶的氨基酸序列基础上进行氨基酸位点的突变，所述氨基酸突变位点包括：E68G、L40Q和P126S中的任一个，通过实验证实E68G、L40Q和P126S三个突变体，相对野生型MMLV逆转录酶，活性分别提升了2.2倍、1.41倍和1.30倍，说明该三个MMLV逆转录酶突变体的逆转录活性相对于野生型MMLV逆转录酶大大提高。