本发明提供一种基因修饰的CAR‑NK细胞及其制备方法和应用，属于遗传工程技术领域；采用含CAR‑Lewis‑Y的重组表达载体感染通用型NK细胞得到CAR‑NK细胞；所述通用型NK细胞为敲除TIGIT基因和敲除ADORA2A基因，并表达IL‑18的NK细胞；本发明还提供上述CAR‑NK细胞的制备方法及其应用。本发明制备的CAR‑Lewis‑Y‑NK细胞，与靶细胞HCC‑827混合培养72h后，细胞因子TNF‑α和IFN‑γ的分泌量明显增加。本发明制备的CAR‑Lewis‑Y‑NK细胞对HCC‑827细胞的杀伤率为91.3%，对LOVO细胞的杀伤率为92.1%。