一种规模化培养细胞源禽流感病毒的方法，属于流感病毒培养技术领域。为解决细胞源禽流感病毒生产过程中存在细胞密度过大，进而导致抗原纯化及浓缩困难的问题，提供了一种利用PK‑15细胞规模化培养禽流感病毒的方法，具体包括利用无血清培养基快速全悬浮驯化PK‑15细胞；全悬浮PK‑15细胞生物反应器放大培养；利用全悬浮PK‑15细胞培养禽流感病毒。本发明所述方法操作简单，极大降低了病毒培养过程中的细胞密度，为规模化生产细胞源禽流感病毒提供了新方法。