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公开(公告)号：CN118460479A
公开(公告)日：2024-08-09
申请号：CN202310072836.1
申请日：2023-02-07
摘要： 本发明公开了一种MDBK悬浮细胞株的应用、牛冠状病毒及其培养方法和牛冠状病毒灭活疫苗及其制备方法，属于兽用生物制品领域。本发明为解决目前使用贴壁细胞对牛冠状病毒进行增殖培养时，采用的是传统贴壁培养，耗时耗力，工艺繁琐的问题以及细胞活率低导致牛冠状病毒不能稳定增殖的问题。所述MDBK悬浮细胞株可以在无血清培养基中使用摇瓶或生物反应器进行扩大培养，获得细胞悬液后接种牛冠状病毒，获得病毒培养液。本发明提供的病毒培养液可用于制备牛冠状病毒灭活疫苗，同时本发明还提供了一种牛冠状病毒灭活疫苗的制备方法，制备出的牛冠状病毒灭活疫苗能够有效预防新生犊牛感染牛冠状病毒。
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公开(公告)号：CN116515769A
公开(公告)日：2023-08-01
申请号：CN202310426670.9
申请日：2023-04-20
摘要： 一种规模化培养细胞源禽流感病毒的方法，属于流感病毒培养技术领域。为解决细胞源禽流感病毒生产过程中存在细胞密度过大，进而导致抗原纯化及浓缩困难的问题，提供了一种利用PK‑15细胞规模化培养禽流感病毒的方法，具体包括利用无血清培养基快速全悬浮驯化PK‑15细胞；全悬浮PK‑15细胞生物反应器放大培养；利用全悬浮PK‑15细胞培养禽流感病毒。本发明所述方法操作简单，极大降低了病毒培养过程中的细胞密度，为规模化生产细胞源禽流感病毒提供了新方法。
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公开(公告)号：CN116694577A
公开(公告)日：2023-09-05
申请号：CN202210183913.6
申请日：2022-02-24
IPC分类号： C12N7/00 , C12N5/071 , A61K39/215 , A61K39/225 , A61K39/245 , A61K39/15 , A61P31/14 , A61P31/22
摘要： 本发明公开了一种利用WAVE波浪式生物反应器培养猪病病毒的方法。属于猪病病毒培养领域。为了提供一种利用WAVE波浪式生物反应器驯化PK‑15悬浮细胞并培养猪病病毒的方法。本发明提供的方法为：1)利用WAVE波浪式生物反应器驯化全悬浮PK‑15细胞；2)全悬浮PK‑15细胞WAVE波浪式生物反应器放大培养；3)利用全悬浮PK‑15细胞在WAVE波浪式生物反应器上培养猪病病毒，所述猪病病毒为猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、伪狂犬病毒或猪轮状病毒。本发明为利用悬浮细胞系培养和增殖猪病病毒提供了可能性。
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公开(公告)号：CN109355434B
公开(公告)日：2022-04-15
申请号：CN201811418448.X
申请日：2018-11-26
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12R1/93
摘要： 本发明公开了一种定量检测鸡马立克氏病毒Meq基因缺失疫苗株和野毒株的荧光定量PCR试剂盒及其应用。所述的试剂盒中含有两套分别用于检测鸡马立克氏病毒Meq基因缺失疫苗株和野毒株的荧光定量PCR引物和探针，其中用于检测鸡马立克氏病毒Meq基因缺失疫苗株的荧光定量PCR引物序列如SEQ ID NO.1以及SEQ ID NO.2所示，探针序列如SEQ ID NO.3所示；用于检测鸡马立克氏病毒野毒株的荧光定量PCR引物序列如SEQ ID NO.4以及SEQ ID NO.5所示，探针序列如SEQ ID NO.6所示。经过体外实验证明本发明的试剂盒敏感性高，特异型好，重复性好，能分别准确定量鸡马立克氏病毒Meq基因缺失疫苗株和MDV野毒株，对于鸡马立克氏病的诊断、疫苗的免疫监控等具有重要意义。
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公开(公告)号：CN109355434A
公开(公告)日：2019-02-19
申请号：CN201811418448.X
申请日：2018-11-26
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12R1/93
CPC分类号： C12Q1/705 , C12Q1/6851 , C12Q2600/166 , C12Q2531/113 , C12Q2545/101 , C12Q2563/107
摘要： 本发明公开了一种定量检测鸡马立克氏病毒Meq基因缺失疫苗株和野毒株的荧光定量PCR试剂盒及其应用。所述的试剂盒中含有两套分别用于检测鸡马立克氏病毒Meq基因缺失疫苗株和野毒株的荧光定量PCR引物和探针，其中用于检测鸡马立克氏病毒Meq基因缺失疫苗株的荧光定量PCR引物序列如SEQ ID NO.1以及SEQ ID NO.2所示，探针序列如SEQ ID NO.3所示；用于检测鸡马立克氏病毒野毒株的荧光定量PCR引物序列如SEQ ID NO.4以及SEQ ID NO.5所示，探针序列如SEQ ID NO.6所示。经过体外实验证明本发明的试剂盒敏感性高，特异型好，重复性好，能分别准确定量鸡马立克氏病毒Meq基因缺失疫苗株和MDV野毒株，对于鸡马立克氏病的诊断、疫苗的免疫监控等具有重要意义。
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公开(公告)号：CN110261599B
公开(公告)日：2022-02-08
申请号：CN201910406683.3
申请日：2019-05-16
IPC分类号： G01N33/535 , G01N33/569 , G01N33/537
摘要： 本发明公开了一种检测A、B亚群禽白血病病毒抗体的ELISA试剂盒及其应用。包括包被截短表达的ALV‑A gp85蛋白以及截短表达的ALV‑B gp85蛋白的酶标板，其中，所述的截短表达的ALV‑A gp85蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述的截短表达的ALV‑B gp85蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明利用截短表达的A、B亚群禽白血病病毒的gp85蛋白建立了A、B亚群禽白血病病毒的抗体间接ELISA检测方法，试验表明，该试剂盒用于检测A、B亚群禽白血病病毒抗体时，其敏感性与同类进口试剂盒相当，但特异性优于同类进口试剂盒，与J亚群禽白血病病毒抗体无交叉反应。本发明的提出为A、B亚群禽白血病病毒的检测和流行病学调查以及早期诊断提供了有效技术手段。
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公开(公告)号：CN110358733A
公开(公告)日：2019-10-22
申请号：CN201910439753.5
申请日：2019-05-24
摘要： 本发明公开了一株稳定表达A亚群禽白血病病毒(ALV-A)gp85蛋白的细胞系及应用。所述的稳定表达A亚群禽白血病病毒gp85蛋白的细胞系，命名为293F-Agp85，该细胞系保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为CGMCC NO.17420。实验证明，该细胞系可以高效稳定表达A亚群禽白血病病毒gp85蛋白，其表达量高达25mg/L。此外，通过与细胞受体Tva互作和结合试验结果表明，由本发明细胞系表达获得的ALV-A gp85蛋白具有正常的生物学活性，能够与细胞受体正常结合，并没有影响其生物学活性，且由于其表达量高，不需要转染，成本低，在体外研究ALV-A感染细胞的机制和建立抗体检测方法等防控技术领域将具有良好的应用前景和意义。
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公开(公告)号：CN110358733B
公开(公告)日：2022-02-15
申请号：CN201910439753.5
申请日：2019-05-24
摘要： 本发明公开了一株稳定表达A亚群禽白血病病毒(ALV‑A)gp85蛋白的细胞系及应用。所述的稳定表达A亚群禽白血病病毒gp85蛋白的细胞系，命名为293F‑Agp85，该细胞系保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为CGMCC NO.17420。实验证明，该细胞系可以高效稳定表达A亚群禽白血病病毒gp85蛋白，其表达量高达25mg/L。此外，通过与细胞受体Tva互作和结合试验结果表明，由本发明细胞系表达获得的ALV‑A gp85蛋白具有正常的生物学活性，能够与细胞受体正常结合，并没有影响其生物学活性，且由于其表达量高，不需要转染，成本低，在体外研究ALV‑A感染细胞的机制和建立抗体检测方法等防控技术领域将具有良好的应用前景和意义。
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公开(公告)号：CN112538464A
公开(公告)日：2021-03-23
申请号：CN202011419903.5
申请日：2020-12-07
IPC分类号： C12N7/01 , C12N15/85 , C12N15/66 , C12N15/64 , C12N15/34 , A61K39/235 , A61P31/20 , A61P1/16 , C12R1/93
摘要： 本发明公开了一种血清4型禽腺病毒反向遗传疫苗株rHN20及其构建方法和应用。本发明构建了我国FAdV‑4新近分离株HLJFAd15基因组全长的感染性克隆粘粒Fos‑rFAdV4，在此基础上将Hexon基因替换为国外弱毒株ON1的Hexon基因获得感染性克隆粘粒Fos‑rHN20。利用Fos‑rHN20成功拯救出疫苗株rHN20。致病性实验显示rHN20对SPF鸡不再有致病性(突变之前具有100％的死亡率)。免疫保护实验证明，接种rHN20的SPF鸡可以完全抵抗FAdV‑4强毒株的攻毒感染，证明rHN20具有非常好的免疫原性，可以作为疫苗候选毒株，同时致弱毒株大大降低了强毒株生物安全的隐患。
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公开(公告)号：CN110261599A
公开(公告)日：2019-09-20
申请号：CN201910406683.3
申请日：2019-05-16
IPC分类号： G01N33/535 , G01N33/569 , G01N33/537
摘要： 本发明公开了一种检测A、B亚群禽白血病病毒抗体的ELISA试剂盒及其应用。包括包被截短表达的ALV-A gp85蛋白以及截短表达的ALV-B gp85蛋白的酶标板，其中，所述的截短表达的ALV-A gp85蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述的截短表达的ALV-B gp85蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明利用截短表达的A、B亚群禽白血病病毒的gp85蛋白建立了A、B亚群禽白血病病毒的抗体间接ELISA检测方法，试验表明，该试剂盒用于检测A、B亚群禽白血病病毒抗体时，其敏感性与同类进口试剂盒相当，但特异性优于同类进口试剂盒，与J亚群禽白血病病毒抗体无交叉反应。本发明的提出为A、B亚群禽白血病病毒的检测和流行病学调查以及早期诊断提供了有效技术手段。
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