本发明属于微生物发酵领域，涉及一种纳豆枯草芽孢杆菌的备种方法及维生素K2的制备方法。本发明提供的纳豆枯草芽孢杆菌的备种方法包括将纳豆枯草芽孢杆菌依次进行菌种活化和种子培养，在种子培养之前，先将菌种活化所得单菌落采用含双氧水的生理盐水进行预处理，并且在种子培养过程中，待OD600≥0.5时，采用乳酸调节pH值至3.5～5.0。本发明提供的方法能够提高发酵过程中菌体在酸性、高温以及乳酸环境下的耐受能力，改善菌体在发酵过程中的生长状况和产物代谢能力，并有利于提高维生素K2的发酵水平及稳定性，实现发酵产量的明显提高，降低物料成本。