本发明公开了4‑羟基苯乙酸‑3‑羟化酶突变体及其应用，4‑羟基苯乙酸‑3‑羟化酶突变体为下列之一：SEQ ID NO.1所示氨基酸序列第63位谷氨酸突变为丝氨酸；SEQ ID NO.1所示氨基酸序列第478位天冬酰胺突变为丝氨酸；本发明的两个基因工程菌发酵生产丹参素的产量与野生型4‑羟基苯乙酸‑3‑羟化酶的工程菌比，分别提高了42.46％和71.64％，分别达到715.24mg/L和861.66mg/L。本发明突破了4‑羟基苯乙酸‑3‑羟化酶对4‑羟基苯乳酸底物特异性差、催化效率低的限制，显著提高了大肠杆菌生产丹参素的产率。本发明催化效率高，工艺简单，绿色环保。