本发明提供了一种检测链霉素残留的侧向层析适配体试纸条的制备方法，属于食品安全检测领域。本发明包括链霉素特异性适配体的定点突变优化和侧向层析适配体试纸条的开发。定点突变STR适配体的酶切位点保证酶反应的进行，根据纳米金比色法测定结合饱和曲线获得亲和力最佳的适配体Apt52‑0。设计包含Apt52‑0的发卡结构，结合Vent®exo‑DNA聚合酶和Nt.AlwI切刻内切酶辅助信号放大实现靶标循环和目的序列置换，制备扩增探针和捕获探针实现信号放大和目的序列与扩增探针的同时识别，开发酶循环和多重AuNPs复合探针的二次信号放大侧向层析适配体试纸条。基于适配体试纸条检测STR的视觉检出限为25 nM，通过Image J软件分析的检出限为17.6 nM，为检测STR提供了一种实惠、高效、简便的手段。