本实用新型涉及手术器械标定技术领域，具体而言，涉及一种穿刺针标定装置及手术导航系统。穿刺针标定装置包括标定块和探针；探针上设有多个用于标定坐标系的反光球，标定块上开设有第一穿孔和第二穿孔，第一穿孔供探针插入，且第一穿孔的孔壁能够在探针插入到位后阻挡探针；第二穿孔供穿刺针插入，且第二穿孔的孔径与待标定的穿刺针的直径一致，探针的端面用于与穿刺针的针尖抵接。手术导航系统包括上述穿刺针标定装置。本实用新型提供的穿刺针标定装置及手术导航系统，对穿刺针进行定位的的过程简单，且技术要求较低。