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公开(公告)号：CN103555667B
公开(公告)日：2015-06-03
申请号：CN201310489260.5
申请日：2013-10-17
申请人： 中国人民解放军第三军医大学
IPC分类号： C12N5/0783
摘要： 本发明公开了利用重组人IL-26分选小鼠Th17细胞的方法，具体为收集小鼠外周血，分离单核细胞，然后用PBS洗涤，离心收集细胞，用PBS液重悬后分离CD4+CD45RO+T细胞；然后将CD4+CD45RO+T细胞用同种荧光标记的IL23R、CD161、CCR6三种抗体染色，用流式细胞仪分选IL23R、CD161和CCR6为阴性的细胞，得IL23R-CD161-CCR6-细胞；所得IL23R-CD161-CCR6-细胞用小鼠CD3抗体和重组人IL-26刺激细胞，得小鼠Th17细胞，获得的小鼠Th17细胞具有活性功能，并且纯度高，其纯度达87%，为体外研究Th17细胞奠定了基础。
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公开(公告)号：CN102776199A
公开(公告)日：2012-11-14
申请号：CN201210267302.6
申请日：2012-07-31
申请人： 中国人民解放军第三军医大学
IPC分类号： C12N15/12 , C12N15/63 , C12N5/0783 , C07K14/705
摘要： 本发明公开了叶酸结合蛋白3的mRNA剪接异构体FR4D3，其核苷酸序列如SEQIDNO.4所示，编码如SEQIDNO.7所示的氨基酸序列，还公开了含有SEQIDNO.4所示核苷酸序列的重组载体，本发明公开的剪接异构体FR4D3编码的蛋白质可以作为细胞分选的标记物，具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN101768589A
公开(公告)日：2010-07-07
申请号：CN201010042067.3
申请日：2010-01-15
申请人： 中国人民解放军第三军医大学
摘要： 本发明公开了IPEX综合征主效基因FOXP3突变基因，其第一段内含子区第68869～68872个碱基AAT和第70207个碱基T缺失；该突变基因为临床约30％的IPEX综合征患者的发病机制提供了新的理论依据，有助于临床上开展疑似IPEX综合征患者的筛查工作以及携带该突变基因的父母的筛查工作，便于生育指导和优生优育；同时，该突变基因为IPEX综合征的药物治疗提供了新的靶点，为IPEX综合征的新药研发提供了理论依据；本发明还提供了该FOXP3突变基因的检测方法和检测试剂盒，操作简便、快速，成本低。
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公开(公告)号：CN103555667A
公开(公告)日：2014-02-05
申请号：CN201310489260.5
申请日：2013-10-17
申请人： 中国人民解放军第三军医大学
IPC分类号： C12N5/0783
摘要： 本发明公开了利用重组人IL-26分选小鼠Th17细胞的方法，具体为收集小鼠外周血，分离单核细胞，然后用PBS洗涤，离心收集细胞，用PBS液重悬后分离CD4+CD45RO+T细胞；然后将CD4+CD45RO+T细胞用同种荧光标记的IL23R、CD161、CCR6三种抗体染色，用流式细胞仪分选IL23R、CD161和CCR6为阴性的细胞，得IL23R-CD161-CCR6-细胞；所得IL23R-CD161-CCR6-细胞用小鼠CD3抗体和重组人IL-26刺激细胞，得小鼠Th17细胞，获得的小鼠Th17细胞具有活性功能，并且纯度高，其纯度达87%，为体外研究Th17细胞奠定了基础。
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公开(公告)号：CN101329230B
公开(公告)日：2010-10-20
申请号：CN200810069979.2
申请日：2008-07-14
申请人： 中国人民解放军第三军医大学
IPC分类号： G01N1/30 , G01N33/533
摘要： 本发明公开了一种改进的免疫荧光细胞染色方法，包括固定/通透、通透、表面染色和核内染色、洗涤、重悬共5个步骤；本发明方法是对eBioscience公司的Foxp3免疫荧光细胞染色方法的改进，将二步多重染色法改为一步多重染色法，同时进行细胞表面染色和核内染色，具有操作简便，染色快速，节约试剂，降低成本等优点，研究显示本发明方法与eBioscience公司方法无显著性差异，可以用于细胞表面和核内同时染色，具有良好的应用前景和推广价值。
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公开(公告)号：CN102732562A
公开(公告)日：2012-10-17
申请号：CN201210215844.9
申请日：2012-06-27
申请人： 中国人民解放军第三军医大学
摘要： 本发明涉及基因领域，特别涉及抑制CYP2C8基因表达的方法，具体为：将RIP140的siRNA转染入靶细胞中，所述RIP140的干扰片段如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3中任一所示，所述RIP140的核苷酸序列如SEQ IDNO：10所示；本发明证实：RIP140和HSP90蛋白是真正的RORγ相互作用蛋白，进一步通过RNA干扰证实RIP140和HSP90蛋白能上调RORγ介导的CYP2C8基因的表达。这些结果支持了RORγ与其相互作用蛋白结合形成复合体，进而发挥转录下游靶基因的作用。
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公开(公告)号：CN103698261A
公开(公告)日：2014-04-02
申请号：CN201410006630.X
申请日：2014-01-07
申请人： 中国人民解放军第三军医大学
IPC分类号： G01N15/14
摘要： 本发明公开了利用RORγt为标记物分选LTi细胞的方法，包括如下步骤：制备淋巴细胞悬液或外周血单个核细胞，然后加入同种类荧光标记的CD3、CD19、CD11c、Gr-1和NKp46抗体，孵育，PBS洗涤，得洗涤细胞；将洗涤细胞固定、清洗、离心，然后进行打孔，经染色后加入与上述不同荧光标记的RORγt抗体，避光反应后清洗细胞，离心，最后上流式细胞仪进行分选CD3、CD19、CD11c、Gr-1CD4、NKp46阴性、RORγt阳性的细胞，得LTi细胞，利用此方法分选LTi细胞，其方法简单，分选获得的LTi细胞纯度高，达95.7%。
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公开(公告)号：CN102766597A
公开(公告)日：2012-11-07
申请号：CN201210268148.4
申请日：2012-07-31
申请人： 中国人民解放军第三军医大学
IPC分类号： C12N5/0783
摘要： 本发明公开了利用FOXP3为标记物分选Treg细胞的方法，具体为，收集外周血单核细胞，用PBS液重悬，然后加入细胞表面标记物CD4抗体和CD25抗体，在温度为10-28℃条件下孵育；然后用PBS洗涤，离心收集细胞，得洗涤细胞；将所得洗涤细胞中加入FOXP3固定破膜剂洗涤，再用FOXP3破膜剂重悬细胞，避光孵育，离心收集沉淀；然后用FOXP3破膜剂重悬细胞；再加入荧光标记的FOXP3抗体，室温避光反应，最后加入细胞染色液重悬细胞，上流式细胞仪进行分选，本发明公开的分选方法，其灵敏度高，分选的Treg细胞纯度高，其纯度大于99.0%。
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公开(公告)号：CN103698261B
公开(公告)日：2016-04-13
申请号：CN201410006630.X
申请日：2014-01-07
申请人： 中国人民解放军第三军医大学
IPC分类号： G01N15/14
摘要： 本发明公开了利用RORγt为标记物分选LTi细胞的方法，包括如下步骤：制备淋巴细胞悬液或外周血单个核细胞，然后加入同种类荧光标记的CD3、CD19、CD11c、Gr-1和NKp46抗体，孵育，PBS洗涤，得洗涤细胞；将洗涤细胞固定、清洗、离心，然后进行打孔，经染色后加入与上述不同荧光标记的RORγt抗体，避光反应后清洗细胞，离心，最后上流式细胞仪进行分选CD3、CD19、CD11c、Gr-1CD4、NKp46阴性、RORγt阳性的细胞，得LTi细胞，利用此方法分选LTi细胞，其方法简单，分选获得的LTi细胞纯度高，达95.7%。
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公开(公告)号：CN102757504A
公开(公告)日：2012-10-31
申请号：CN201210215680.X
申请日：2012-06-27
申请人： 中国人民解放军第三军医大学
摘要： 本发明涉及RORγ-CTAP融合蛋白，所述RORγ-CTAP融合蛋白从氨基末端到羧基末端依次由RORγ和CTAP融合标签组成，所述RORγ指维甲酸相关孤儿核受体γ，所述CTAP融合标从氨基末端到羧基末端依次由SBP、TEV蛋白酶切位点以及protG组成，RORγ相互作用蛋白的捕获方法为：用RORγ抗体、protG抗体和SBP抗体中任一种或多种对核蛋白进行蛋白印迹检测，并通过显影定影技术获得蛋白条带，所述蛋白条带为RORγ相互作用蛋白；本发明中构建的RORγ-CTAP融合基因序列准确且各组成部分表达正确，能够用于细胞内RORγ蛋白复合物的纯化，适用于大多数实验室在进行RORγ蛋白质复合物研究时采用，具有良好的推广应用价值。
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