公开(公告)号：CN116103342A

公开(公告)日：2023-05-12

申请号：CN202211612527.0

申请日：2022-12-14

申请人： 中国农业大学

发明人： 于坤 ,  邓守龙 ,  许雪玲 ,  李岩 ,  连正兴

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N15/113 ,  C12N15/90 ,  C12Q1/6888 ,  C12Q1/6897 ,  C12N15/11

摘要： 本发明公开了基于CRISPR‑Cas9系统和PB转座子系统的羊早期胚胎发育的谱系示踪方法，具体是CRISPR‑Cas9介导的羊Rosa26基因敲除和定点插入Cas9‑T2A‑EGFP基因的方法，用来对合成靶DNA进行编辑。本发明还提供由合成靶DNA介导的谱系示踪载体。该载体包含40种整合条码和合成靶DNA及相应的三个独立转录sgRNA。该合成靶DNA嵌入在表达红色荧光蛋白tdTomato的PB转座子载体上。此系统能够产生大量的可遗传修复结果，并可通过整合条形码对这些序列进行区分。该谱系示踪载体体系可直接转染目标细胞，随着发育对目标细胞进行追踪，提供反刍动物发育的综合分子细胞图谱，应用前景广阔。

公开(公告)号：CN114908097A

公开(公告)日：2022-08-16

申请号：CN202210693445.7

申请日：2022-06-17

申请人： 中国农业大学

发明人： 于坤 ,  邓守龙 ,  许雪玲 ,  杜旭光 ,  李攀 ,  卢天宇

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/55 ,  C12N15/90 ,  C12N15/65 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10

摘要： 本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种将40种整合条形码片段与强力霉素(Doxycycline，Dox)调控CRISPR/Cas9编辑产生的indels相结合用于研究哺乳动物细胞在发育、再生和器官形成过程的谱系示踪研究方法。

公开(公告)号：CN114908097B

公开(公告)日：2023-01-13

申请号：CN202210693445.7

申请日：2022-06-17

申请人： 中国农业大学(CN)

发明人： 于坤 ,  邓守龙 ,  许雪玲 ,  杜旭光 ,  李攀 ,  卢天宇

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/55 ,  C12N15/90 ,  C12N15/65 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10

摘要： 本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种将40种整合条形码片段与强力霉素(Doxycycline，Dox)调控CRISPR/Cas9编辑产生的indels相结合用于研究哺乳动物细胞在发育、再生和器官形成过程的谱系示踪研究方法。