公开(公告)号：CN106048067B

公开(公告)日：2020-02-18

申请号：CN201610673491.5

申请日：2016-08-16

申请人： 中国科学院寒区旱区环境与工程研究所

发明人： 张玉宝 ,  王亚军 ,  谢忠奎 ,  王乐 ,  王若愚 ,  杨果 ,  郭志鸿 ,  邱阳

IPC分类号： C12Q1/6851

摘要： 一种兰州百合病程相关蛋白PR1基因定量检测的试剂盒及其检测方法，试剂盒主要包括特异性引物、第一链cDNAs合成试剂、荧光定量PCR反应试剂以及阳性对照品和阴性对照品；特异性引物由兰州百合PR1基因和内参18S rRNA基因的特异性引物组成；阳性对照品为兰州百合PR1基因标准品以及内参18S rRNA基因标准品；阴性对照品为DEPC水；本发明针对兰州百合PR1基因提供了一种快速、敏感、特异的定量检测试剂盒和检测方法，为兰州百合PR1基因的表达及检测诊断提供了技术支持。

公开(公告)号：CN105803113B

公开(公告)日：2020-02-18

申请号：CN201610210090.6

申请日：2016-04-07

申请人： 中国科学院寒区旱区环境与工程研究所

发明人： 张玉宝 ,  陈延 ,  王亚军 ,  谢忠奎 ,  王若愚 ,  郭志鸿 ,  杨果

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/686

摘要： 本发明提供了一种免疫捕获双重RT‑PCR同步检测百合隐症病毒和百合斑驳病毒的方法，其步骤包括在同一个PCR反应管中用LSV和LMoV的多克隆抗体特异性捕获LSV和LMoV粒子、利用LSV和LMoV的特异性引物进行双重反转录聚合酶链式反应RT‑PCR、琼脂糖凝胶电泳检测目的片段；该方法将ELISA和RT‑PCR结合，对现有的免疫捕获RT‑PCR进行了改进，实现了用免疫捕获RT‑PCR同步检测两种百合病毒LSV和LMoV，从而完善了免疫捕获RT‑PCR技术。

公开(公告)号：CN108796127A

公开(公告)日：2018-11-13

申请号：CN201810641531.7

申请日：2018-06-21

申请人： 中国科学院寒区旱区环境与工程研究所

发明人： 张玉宝 ,  王亚军 ,  谢忠奎 ,  杨果 ,  郭志鸿 ,  邱阳 ,  何玉惠

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/6804 ,  C12Q1/6844 ,  C12R1/94

CPC分类号： C12Q1/701 ,  C12Q1/6804 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q2563/131 ,  C12Q2521/107 ,  C12Q2531/119 ,  C12Q2563/107 ,  C12Q2565/125

摘要： 一种特异性检测百合斑驳病毒LMoV的IC‑RT‑LAMP试剂盒及其检测方法，试剂盒主要包括特异性LMoV抗体IgG、特异性RT反向引物LMoV‑R、特异性LAMP引物组、第一链cDNA合成试剂、LAMP扩增反应试剂、荧光染料检测液、阴性对照品和阳性对照品；特异性LAMP引物组由正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP、反向内引物BIP、正向环引物LF和反向环引物LB组成；阴性对照品为ddH2O，阳性对照品为兰州百合LMoV CP基因标准品；本发明不用提取RNA，不需要酶标仪、PCR仪或荧光定量PCR仪等分子生物学专业仪器设备，在恒温水浴中即能完成扩增反应，特异性和灵敏度高，操作简便，适用性强，可用于监控百合LMoV病毒的发生、扩散和流行，适合在基层推广应用。

公开(公告)号：CN105606801B

公开(公告)日：2017-11-10

申请号：CN201510951206.7

申请日：2015-12-19

申请人： 中国科学院寒区旱区环境与工程研究所

发明人： 张玉宝 ,  王亚军 ,  谢忠奎 ,  王若愚 ,  王乐 ,  郭志鸿

IPC分类号： G01N33/569 ,  G01N33/558 ,  G01N33/531 ,  G01N33/532 ,  G01N21/78

摘要： 一种百合X病毒半定量检测金标卡及制备方法，为了提高胶体金免疫层析检测方法的使用效率和田间普及率，实现对百合病毒的快速且半定量检测，将检测线增加至三条，再将已知量的有浓度差异的抗体分别包被于检测线，研制能快速半定量检测LVX的金标卡，满足百合大规模脱毒及田间对百合病毒快速半定量检测的需求；所述金标卡检测针对性强，操作简便，准确性高，灵敏性强，无需借助任何仪器和设备，就可以准确检测样品之间病毒含量的差异。

公开(公告)号：CN106048070A

公开(公告)日：2016-10-26

申请号：CN201610675101.8

申请日：2016-08-16

申请人： 中国科学院寒区旱区环境与工程研究所 ,  徐州沐阳生物科技发展有限公司

发明人： 张玉宝 ,  王乐 ,  王亚军 ,  谢忠奎 ,  杨果 ,  王若愚 ,  郭志鸿

IPC分类号： C12Q1/68

CPC分类号： C12Q1/6851 ,  C12Q2545/114 ,  C12Q2563/107

摘要： 一种百合转录调节因子WRKY33基因定量检测的试剂盒及其检测方法，该试剂盒主要包括特异性引物、第一链cDNA合成试剂、荧光定量PCR反应试剂以及阳性对照品和阴性对照品；特异性引物由百合WRKY33基因和内参18S rRNA基因的特异性引物组成；阳性对照品为百合WRKY33基因标准品以及内参18S rRNA基因标准品；阴性对照品为DEPC水；本发明针对百合WRKY33基因提供了一种快速、敏感、特异的定量检测试剂盒和检测方法，为研究百合WRKY33基因与病毒抑制剂或水杨酸等诱导植物抗病性的关系提供了技术支持。

公开(公告)号：CN105606801A

公开(公告)日：2016-05-25

申请号：CN201510951206.7

申请日：2015-12-19

申请人： 中国科学院寒区旱区环境与工程研究所

发明人： 张玉宝 ,  王亚军 ,  谢忠奎 ,  王若愚 ,  王乐 ,  郭志鸿

IPC分类号： G01N33/569 ,  G01N33/558 ,  G01N33/531 ,  G01N33/532 ,  G01N21/78

摘要： 一种百合X病毒半定量检测金标卡及制备方法，为了提高胶体金免疫层析检测方法的使用效率和田间普及率，实现对百合病毒的快速且半定量检测，将检测线增加至三条，再将已知量的有浓度差异的抗体分别包被于检测线，研制能快速半定量检测LVX的金标卡，满足百合大规模脱毒及田间对百合病毒快速半定量检测的需求；所述金标卡检测针对性强，操作简便，准确性高，灵敏性强，无需借助任何仪器和设备，就可以准确检测样品之间病毒含量的差异。

公开(公告)号：CN105116145A

公开(公告)日：2015-12-02

申请号：CN201510299867.6

申请日：2015-06-05

申请人： 中国科学院寒区旱区环境与工程研究所

发明人： 张玉宝 ,  陈延 ,  王亚军 ,  刘维 ,  谢忠奎 ,  王若愚 ,  郭志鸿 ,  王乐

IPC分类号： G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  G01N33/558

摘要： 一种用单抗金标试验检测百合斑驳病毒的方法，从天然感染LMoV并具有明显斑驳症状的东方百合叶片上提取和纯化天然的LMoV，纯化后的LMoV粒子用来制备单克隆抗体Mab1和Mab2，用胶体金标记第一单克隆抗体Mab1，将其作为失踪标记物，在检测线和对照线与第二单克隆抗体Mab2及羊抗鼠IgG纯化抗体发生特异性结合而显色，根据检测线、对照线显色与否来判定阴阳性结果；该方法无需专门培训，可快速、简便、准确检测百合斑驳病毒。

公开(公告)号：CN104122390A

公开(公告)日：2014-10-29

申请号：CN201410151342.3

申请日：2014-04-14

申请人： 中国科学院寒区旱区环境与工程研究所

发明人： 张玉宝 ,  王亚军 ,  谢忠奎 ,  王若愚 ,  郭志鸿 ,  张丽华

IPC分类号： G01N33/569 ,  G01N33/543

摘要： 一种百合隐症病毒胶体金免疫层析检测试剂卡及制备方法，该试剂卡包括试剂卡槽、衬板、样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸，其中胶体金结合垫上含有金标探针，衬板固定于试剂卡槽中，样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸依次排列连接于衬板上表面，硝酸纤维素膜上设有检测线和对照线，检测线和对照线上分别包被的是兔抗LSV多克隆抗体和羊抗兔IgG纯化抗体；该百合隐症病毒胶体金免疫层析检测试剂卡的制备方法主要是将兔抗LSV多克隆抗体包被于免疫层析膜上，同时用其制成用胶体金结合垫；该试剂卡检测快速、准确率高、特异性强、操作简便，无需特殊的设备和仪器。

公开(公告)号：CN101915835B

公开(公告)日：2013-06-19

申请号：CN201010233082.6

申请日：2010-07-22

申请人： 中国科学院寒区旱区环境与工程研究所

发明人： 童勋章 ,  谢忠奎 ,  王亚军 ,  张玉宝 ,  安丽萍 ,  郭志鸿 ,  张亚娟

IPC分类号： G01N33/569 ,  G01N33/535 ,  C12N15/40 ,  C12N15/63 ,  C07K19/00 ,  C07K16/10

摘要： 一种百合斑驳病毒双抗体夹心酶联免疫检测试剂盒及制备方法，检测试剂盒包括：96微孔ELISA板，酶标抗体，缓冲液，显色液，终止液，其中96孔板上包被有LMoV特异的多克隆抗体，酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的LMoV特异多克隆抗体。本发明采用的免疫原为基因工程表达的LMoV外壳蛋白和细胞质内含体蛋白的融合重组抗原。由此免疫产生的抗体建立的双抗夹心酶联免疫吸附法用于检测百合叶片标本，与其他检测方法相比，检测灵敏度高，可以检出ng级别的病毒抗原，并且准确性强，试剂盒的制备方法简便快捷，经济实用。

公开(公告)号：CN101915835A

公开(公告)日：2010-12-15

申请号：CN201010233082.6

申请日：2010-07-22

申请人： 中国科学院寒区旱区环境与工程研究所

发明人： 童勋章 ,  谢忠奎 ,  王亚军 ,  张玉宝 ,  安丽萍 ,  郭志鸿 ,  张亚娟

IPC分类号： G01N33/569 ,  G01N33/535 ,  C12N15/40 ,  C12N15/63 ,  C07K19/00 ,  C07K16/10

摘要： 一种百合斑驳病毒双抗体夹心酶联免疫检测试剂盒及制备方法，检测试剂盒包括：96微孔ELISA板，酶标抗体，缓冲液，显色液，终止液，其中96孔板上包被有LMoV特异的多克隆抗体，酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的LMoV特异多克隆抗体。本发明采用的免疫原为基因工程表达的LMoV外壳蛋白和细胞质内含体蛋白的融合重组抗原。由此免疫产生的抗体建立的双抗夹心酶联免疫吸附法用于检测百合叶片标本，与其他检测方法相比，检测灵敏度高，可以检出ng级别的病毒抗原，并且准确性强，试剂盒的制备方法简便快捷，经济实用。