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公开(公告)号：CN106755062A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201611022617.9
申请日：2016-11-17
申请人： 北京大北农科技集团股份有限公司 , 北京大北农生物技术有限公司
CPC分类号： C12N15/8278 , C12N9/0069
摘要： 本发明涉及一种使用磺酰脲类除草剂水解酶基因作为选择性标记的转化方法，所述选择转化的植物细胞的方法包括：使用含有目标基因和编码磺酰脲类除草剂水解酶的基因的重组载体，转化植物细胞；在ALS抑制剂的存在下经过两个筛选培养期培养上述转化后的植物细胞，以编码磺酰脲类除草剂水解酶的基因作为选择性标记；选择未被杀死和/或未被抑制的植物细胞。本发明首次提出在植物转化过程中以磺酰脲类除草剂水解酶基因作为选择标记物，并经过两次不同浓度选择剂的筛选，其后代获得阳性植株的比例显著升高；同时本发明使用磺酰脲类除草剂水解酶基因作为选择标记物的转化获得的转基因植株商业价值高、抗性好且遗传稳定。
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公开(公告)号：CN106755061A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201611020297.3
申请日：2016-11-17
申请人： 北京大北农科技集团股份有限公司 , 北京大北农生物技术有限公司
CPC分类号： C12N15/821
摘要： 本发明涉及一种使用磺酰脲类除草剂水解酶基因作为选择性标记的转化方法，所述转化方法包括：使用含有目标基因和编码磺酰脲类除草剂水解酶的基因的重组载体，转化宿主细胞；在ALS抑制剂的存在下培养上述步骤中所得的转化细胞；使用编码磺酰脲类除草剂水解酶的基因作为选择性标记，所述磺酰脲类除草剂水解酶的氨基酸序列具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。本发明首次提出在植物转化过程中以磺酰脲类除草剂水解酶基因作为选择标记物，并经过二次不同浓度选择剂的筛选，其后代获得阳性植株的比例显著升高；同时本发明使用磺酰脲类除草剂水解酶基因作为选择标记物的转化获得的转基因植株商业价值高、抗性好且遗传稳定。
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公开(公告)号：CN103421816B
公开(公告)日：2016-06-08
申请号：CN201310289848.6
申请日：2013-07-11
申请人： 北京大北农科技集团股份有限公司 , 北京大北农生物技术有限公司
IPC分类号： C12N15/32 , C12N15/70 , C12N15/84 , C12N1/21 , C12N5/10 , A01H5/00 , C12P21/02 , A01N47/44 , A01P7/04 , C12R1/07
摘要： 本发明涉及一种杀虫基因及其用途，所述杀虫基因的核苷酸序列包括：（a）具有SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列；或（b）与（a）的核苷酸序列同类编码，且不为SEQ ID NO:22；或（c）在严格条件下与（a）或（b）限定的核苷酸序列杂交且编码具有杀虫活性的蛋白质的核苷酸序列。本发明杀虫基因特别适合在单子叶植物中表达，显著提高了Vip3Aa-02杀虫蛋白的表达量、稳定性和毒力；同时本发明通过植物体内产生能够杀死大螟的Vip3A蛋白来控制大螟害虫，对植物进行全生育期、全植株的保护以防治大螟害虫的侵害，且无污染、无残留，效果稳定、彻底，简单、方便、经济。
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公开(公告)号：CN103509808A
公开(公告)日：2014-01-15
申请号：CN201310289850.3
申请日：2013-07-11
IPC分类号： C12N15/32 , C12N15/70 , C12N15/84 , C12N1/21 , C12N5/10 , A01H5/00 , C12P21/02 , A01N47/44 , A01P7/04 , C12R1/085
摘要： 本发明涉及一种杀虫基因及其用途，所述杀虫基因的核苷酸序列包括：（a）具有SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列；或（b）与（a）的核苷酸序列同类编码，且不为SEQ ID NO:22；或（c）在严格条件下与（a）或（b）限定的核苷酸序列杂交且编码具有杀虫活性的蛋白质的核苷酸序列。本发明杀虫基因特别适合在单子叶植物中表达，显著提高了Vip3Aa-01杀虫蛋白的表达量、稳定性和毒力；同时本发明通过植物体内产生能够杀死大螟的Vip3A蛋白来控制大螟害虫，对植物进行全生育期、全植株的保护以防治大螟害虫的侵害，且无污染、无残留，效果稳定、彻底，简单、方便、经济。
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公开(公告)号：CN103421816A
公开(公告)日：2013-12-04
申请号：CN201310289848.6
申请日：2013-07-11
IPC分类号： C12N15/32 , C12N15/70 , C12N15/84 , C12N1/21 , C12N5/10 , A01H5/00 , C12P21/02 , A01N47/44 , A01P7/04 , C12R1/07
摘要： 本发明涉及一种杀虫基因及其用途，所述杀虫基因的核苷酸序列包括：（a）具有SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列；或（b）与（a）的核苷酸序列同类编码，且不为SEQ ID NO:22；或（c）在严格条件下与（a）或（b）限定的核苷酸序列杂交且编码具有杀虫活性的蛋白质的核苷酸序列。本发明杀虫基因特别适合在单子叶植物中表达，显著提高了Vip3Aa-02杀虫蛋白的表达量、稳定性和毒力；同时本发明通过植物体内产生能够杀死大螟的Vip3A蛋白来控制大螟害虫，对植物进行全生育期、全植株的保护以防治大螟害虫的侵害，且无污染、无残留，效果稳定、彻底，简单、方便、经济。
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公开(公告)号：CN103525864B
公开(公告)日：2015-12-30
申请号：CN201310546099.0
申请日：2013-11-06
摘要： 本发明涉及一种转化大豆的方法，包括：大豆种子萌发后去除子叶和第一片真叶，获得裸露的分生组织；所述裸露的分生组织接种到含有细胞分裂素的预处理培养基上进行预处理；农杆菌侵染所述预处理后的分生组织块。本发明转化大豆的方法首次公开了将预处理后的大豆分生组织块作为外植体材料；在农杆菌侵染之前通过对外植体材料进行高浓度的细胞分裂素处理，使得大豆的分生组织处于活跃状态，易于外源基因的插入，同时通过分生组织的增值变大，使得侵染过程更加便于操作；在农杆菌侵染过程中，加入了超声波处理，使外源基因插入植物基因组的效率大大增加，大豆的转化效率可达10%；同时转化周期短、嵌合体少、转化成本低。
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公开(公告)号：CN103039494A
公开(公告)日：2013-04-17
申请号：CN201210518478.4
申请日：2012-12-05
CPC分类号： C12N15/8286 , A01N37/46 , A01N63/02 , C07K14/32 , Y02A40/162
摘要： 本发明涉及一种控制大螟害虫的方法，包括：将大螟害虫与Vip3A蛋白接触。本发明通过植物体内产生能够杀死大螟的Vip3A蛋白来控制大螟害虫；与现有技术使用的农业防治方法、化学防治方法和生物防治方法相比，本发明对植物进行全生育期、全植株的保护以防治大螟害虫的侵害，且无污染、无残留，效果稳定、彻底，简单、方便、经济。
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公开(公告)号：CN103509808B
公开(公告)日：2015-07-15
申请号：CN201310289850.3
申请日：2013-07-11
IPC分类号： C12N15/32 , C12N15/70 , C12N15/84 , C12N1/21 , C12N5/10 , A01H5/00 , C12P21/02 , A01N47/44 , A01P7/04 , C12R1/085
摘要： 本发明涉及一种杀虫基因及其用途，所述杀虫基因的核苷酸序列包括：（a）具有SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列；或（b）与（a）的核苷酸序列同类编码，且不为SEQ ID NO:22；或（c）在严格条件下与（a）或（b）限定的核苷酸序列杂交且编码具有杀虫活性的蛋白质的核苷酸序列。本发明杀虫基因特别适合在单子叶植物中表达，显著提高了Vip3Aa-01杀虫蛋白的表达量、稳定性和毒力；同时本发明通过植物体内产生能够杀死大螟的Vip3A蛋白来控制大螟害虫，对植物进行全生育期、全植株的保护以防治大螟害虫的侵害，且无污染、无残留，效果稳定、彻底，简单、方便、经济。
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公开(公告)号：CN103525864A
公开(公告)日：2014-01-22
申请号：CN201310546099.0
申请日：2013-11-06
摘要： 本发明涉及一种转化大豆的方法，包括：大豆种子萌发后去除子叶和第一片真叶，获得裸露的分生组织；所述裸露的分生组织接种到含有细胞分裂素的预处理培养基上进行预处理；农杆菌侵染所述预处理后的分生组织块。本发明转化大豆的方法首次公开了将预处理后的大豆分生组织块作为外植体材料；在农杆菌侵染之前通过对外植体材料进行高浓度的细胞分裂素处理，使得大豆的分生组织处于活跃状态，易于外源基因的插入，同时通过分生组织的增值变大，使得侵染过程更加便于操作；在农杆菌侵染过程中，加入了超声波处理，使外源基因插入植物基因组的效率大大增加，大豆的转化效率可达10%；同时转化周期短、嵌合体少、转化成本低。
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公开(公告)号：CN107099548B
公开(公告)日：2020-11-03
申请号：CN201710319417.8
申请日：2017-05-09
申请人： 北京大北农生物技术有限公司
摘要： 本发明涉及一种提高大豆转化效率的方法，所述选择转化的植物细胞的方法包括：使用含有目标基因和编码磺酰脲类除草剂水解酶的基因的重组载体，转化植物细胞；通过外施ALS抑制剂对上述转化后的植物细胞进行筛选培养，以编码磺酰脲类除草剂水解酶的基因作为选择标记物；选择未被杀死和/或未被抑制的植物细胞。本发明首次提出在植物转化过程中以外施的方式(特别是滴加)将选择剂加入增殖培养基和分化培养基中，并优化了选择剂有效的筛选浓度范围，其后代获得阳性植株的比例和转化效率显著升高；同时本发明使用磺酰脲类除草剂水解酶基因作为选择标记物的转化获得的转基因植株商业价值高、抗性好且遗传稳定。
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