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公开(公告)号：CN116064445B
公开(公告)日：2025-04-01
申请号：CN202211116744.0
申请日：2022-09-14
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种亮氨酸脱氢酶突变体及其在生产L‑2‑氨基丁酸中的应用，属于酶工程和微生物工程技术领域。本发明的亮氨酸脱氢酶突变体通过将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的亮氨酸脱氢酶的第125位缬氨酸突变为蛋氨酸得到，突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明的亮氨酸脱氢酶突变体催化活性提高，相对于野生型，突变体酶的酶活提高了55％。在300mM浓度的2‑羰基丁酸钠的条件下，反应6h后转化率可达到94％以上。
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公开(公告)号：CN113999827B
公开(公告)日：2022-04-22
申请号：CN202111431087.4
申请日：2021-11-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种亮氨酸脱氢酶突变体及其制备方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明将来源于微生物Exiguobacterium sibiricum的NADH依赖型亮氨酸脱氢酶(LeuDH)作为亲本，基于定点突变技术对酶结构进行改造，通过半理性设计的方法获得了催化活性提高的突变体K77S/N270L/L52S和K77S/N270L/T143C。相对于亲本无法催化戊酮，该突变体酶在25℃孵育条件下，对戊酮体现催化活性。本发明所述突变体使得难以催化的戊酮底物展现催化活性，具有更好的工业化应用前景。
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公开(公告)号：CN116064445A
公开(公告)日：2023-05-05
申请号：CN202211116744.0
申请日：2022-09-14
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种亮氨酸脱氢酶突变体及其在生产L‑2‑氨基丁酸中的应用，属于酶工程和微生物工程技术领域。本发明的亮氨酸脱氢酶突变体通过将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的亮氨酸脱氢酶的第125位缬氨酸突变为蛋氨酸得到，突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明的亮氨酸脱氢酶突变体催化活性提高，相对于野生型，突变体酶的酶活提高了55％。在300mM浓度的2‑羰基丁酸钠的条件下，反应6h后转化率可达到94％以上。
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公开(公告)号：CN113999827A
公开(公告)日：2022-02-01
申请号：CN202111431087.4
申请日：2021-11-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种亮氨酸脱氢酶突变体及其制备方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明将来源于微生物Exiguobacterium sibiricum的NADH依赖型亮氨酸脱氢酶(LeuDH)作为亲本，基于定点突变技术对酶结构进行改造，通过半理性设计的方法获得了催化活性提高的突变体K77S/N270L/L52S和K77S/N270L/T143C。相对于亲本无法催化戊酮，该突变体酶在25℃孵育条件下，对戊酮体现催化活性。本发明所述突变体使得难以催化的戊酮底物展现催化活性，具有更好的工业化应用前景。
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