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公开(公告)号：CN107299105B
公开(公告)日：2020-09-25
申请号：CN201710687638.0
申请日：2017-08-11
申请人： 河南省农业科学院园艺研究所 , 河南省驻马店农业学校
摘要： 本发明公开了一种西瓜枯萎病菌致病性基因FonAGL3、其缺失DNA片段、缺失突变体及其应用。旨在解决西瓜枯萎病生物防治的技术问题。本发明根据西瓜枯萎病菌T‑DNA插入突变体库分析和筛选发现的一种源于西瓜尖孢镰刀菌的致病性基因FonAGL3，采用基因同源置换原理，用抗性基因潮霉素B（HPH）基因DNA片段替换目的基因FonAGL3的DNA片段，通过构建该基因缺失载体及野生型菌株FON‑11‑06遗传转化获得FonAGL3基因缺失突变体，该FonAGL3突变体菌剂具有良好枯萎病防治效果，且环境友好，防治成本低廉。
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公开(公告)号：CN107299105A
公开(公告)日：2017-10-27
申请号：CN201710687638.0
申请日：2017-08-11
申请人： 河南省农业科学院园艺研究所 , 河南省驻马店农业学校
摘要： 本发明公开了一种西瓜枯萎病菌致病性基因FonAGL3、其缺失DNA片段、缺失突变体及其应用。旨在解决西瓜枯萎病生物防治的技术问题。本发明根据西瓜枯萎病菌T-DNA插入突变体库分析和筛选发现的一种源于西瓜尖孢镰刀菌的致病性基因FonAGL3，采用基因同源置换原理，用抗性基因潮霉素B（ HPH）基因DNA片段替换目的基因FonAGL3的DNA片段，通过构建该基因缺失载体及野生型菌株FON-11-06遗传转化获得FonAGL3基因缺失突变体，该FonAGL3突变体菌剂具有良好枯萎病防治效果，且环境友好，防治成本低廉。
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公开(公告)号：CN111548951B
公开(公告)日：2022-03-25
申请号：CN202010246791.1
申请日：2020-03-31
申请人： 河南省农业科学院园艺研究所
摘要： 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌Pro6A5、其菌剂和制备方法及在甜瓜栽培中的应用，旨在解决甜瓜栽培中防治病害有限的技术问题。本发明首次筛选出一株枯草芽孢杆菌Pro6A5，并保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO.M 2017196。枯草芽孢杆菌Pro6A5制备的微生物菌剂防治细菌病害效果较好，对甜瓜细菌性果斑病菌、桃细菌性穿孔病菌、烟草青枯病菌、白菜软腐病菌和番茄溃疡病菌等有较强的抑制作用；还能够克服盐碱地甜瓜重茬连作障碍；防治高效、使用简单、无造成环境污染。
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公开(公告)号：CN104152442B
公开(公告)日：2017-04-05
申请号：CN201410336970.9
申请日：2014-07-16
申请人： 河南省农业科学院园艺研究所
摘要： 本发明涉及一种T‑DNA及其真菌插入位点右臂侧翼基因组序列的扩增引物和鉴定方法。本发明T‑DNA包括左臂、右臂DNA，以及二者之间的多克隆位点和eGFP基因，且该T‑DNA具有SEQ ID NO.9所示的核苷酸序列，本发明公开了其载体及构建方法；该T‑DNA的真菌插入位点右臂侧翼基因组序列的巢式PCR扩增的上游引物对应于eGFP基因的左端序列，下游引物对应于右臂的左端序列；该右臂侧翼基因组序列的鉴定方法包括基因组DNA提取、酶切处理、纯化处理、连接反应、巢式PCR扩增及其产物鉴定、克隆和测序等步骤。本发明引物特异性强，能够快速、准确、高效、稳定、普适性地扩增出T‑DNA的右臂侧翼基因组DNA序列，大大提高鉴定效率。
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公开(公告)号：CN113151559B
公开(公告)日：2023-06-13
申请号：CN202110465352.4
申请日：2021-04-28
申请人： 河南省农业科学院园艺研究所
IPC分类号： C12Q1/6895 , C12Q1/6858 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了一种厚皮甜瓜杂交种子纯度鉴定方法，解决传统种子纯度鉴定周期长、人为因素影响大、难以满足市场快速、准确鉴别需要的技术问题。本发明综合考量SSR位点等多重因素，筛选获得EST‑SSR引物SSR8，以其扩增待验样品DNA，经凝胶电泳获取条带图谱，并与父本、母本图谱条带进行对比，同时具有父、母本特异带型的为真正的杂交种，缺少两亲本中任意一条特征带或者为非亲本特异条带的均为假杂种。本发明方法能够有效的区分雪彤8号的双亲及其杂交种，能够快速、准确地鉴定其种子纯度。
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公开(公告)号：CN105255715A
公开(公告)日：2016-01-20
申请号：CN201510790922.1
申请日：2015-11-17
申请人： 河南省农业科学院园艺研究所
摘要： 本发明涉及一种高通量、多用途、可调控微生物接种装置及批量接种菌株的方法。本发明旨在解决现有技术中筛选菌株工作量大、污染大、浪费试剂且可视性对比效果差的问题。本发明包括接种器、样品管架及置于该样品管架中的离心管或试管；接种器包括底板及垂直安装于该底板上的接种针阵列，其由以一定方式排列布置的接种针构成，离心管或试管的数量和排列方式与接种针阵列相对应，以使接种针在接种器与样品管架相对接时能没入对应的离心管或试管中。本发明的有益效果在于：单次成批量的培养菌株、结构简单便于实施、节省试剂，能够在培育环境一致的条件状态下进行对比，使试验结果更准确、可靠。
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公开(公告)号：CN104152442A
公开(公告)日：2014-11-19
申请号：CN201410336970.9
申请日：2014-07-16
申请人： 河南省农业科学院园艺研究所
摘要： 本发明涉及一种T-DNA及其真菌插入位点右臂侧翼基因组序列的扩增引物和鉴定方法。本发明T-DNA包括左臂、右臂DNA，以及二者之间的多克隆位点和eGFP基因，且该T-DNA具有SEQIDNO.9所示的核苷酸序列，本发明公开了其载体及构建方法；该T-DNA的真菌插入位点右臂侧翼基因组序列的巢式PCR扩增的上游引物对应于eGFP基因的左端序列，下游引物对应于右臂的左端序列；该右臂侧翼基因组序列的鉴定方法包括基因组DNA提取、酶切处理、纯化处理、连接反应、巢式PCR扩增及其产物鉴定、克隆和测序等步骤。本发明引物特异性强，能够快速、准确、高效、稳定、普适性地扩增出T-DNA的右臂侧翼基因组DNA序列，大大提高鉴定效率。
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公开(公告)号：CN111778173B
公开(公告)日：2022-04-15
申请号：CN202010244458.7
申请日：2020-03-31
申请人： 河南省农业科学院园艺研究所
摘要： 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌Pro1A2、其菌剂和制备方法及在甜瓜栽培中的应用，旨在解决甜瓜栽培中病害防治效果不佳和连作障碍难以克服的技术问题。本发明首次筛选出一株枯草芽孢杆菌Pro1A2，并保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO. M 2017194。枯草芽孢杆菌Pro1A2制备的微生物菌剂既能够对植物真菌病害如甜瓜蔓枯病、甜瓜枯萎病、小麦全蚀病、稻瘟病等有较好的防治效果，又在防治细菌病害方面效果良好，如对甜瓜细菌性果斑病菌、桃细菌性穿孔病菌、烟草青枯病菌、白菜软腐病菌和番茄溃疡病菌等有较强的抑制作用；还能够克服甜瓜早衰重茬连作障碍；防治高效、使用简单、无造成环境污染。
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公开(公告)号：CN113151559A
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN202110465352.4
申请日：2021-04-28
申请人： 河南省农业科学院园艺研究所
IPC分类号： C12Q1/6895 , C12Q1/6858 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了一种厚皮甜瓜杂交种子纯度鉴定方法，解决传统种子纯度鉴定周期长、人为因素影响大、难以满足市场快速、准确鉴别需要的技术问题。本发明综合考量SSR位点等多重因素，筛选获得EST‑SSR引物SSR8，以其扩增待验样品DNA，经凝胶电泳获取条带图谱，并与父本、母本图谱条带进行对比，同时具有父、母本特异带型的为真正的杂交种，缺少两亲本中任意一条特征带或者为非亲本特异条带的均为假杂种。本发明方法能够有效的区分雪彤8号的双亲及其杂交种，能够快速、准确地鉴定其种子纯度。
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公开(公告)号：CN110999783A
公开(公告)日：2020-04-14
申请号：CN201911169729.0
申请日：2019-11-26
申请人： 河南省农业科学院园艺研究所
IPC分类号： A01H4/00
摘要： 本发明公开了一种用于甜瓜单倍体培养未授粉子房的保存及恢复培养，包括：取未授粉子房进行4℃暗处理2d，消毒灭菌后放入0.4 mol/L的蔗糖溶液中，室温暗处理1d，用3%海藻酸钠3min和0.1mol/L氯化钙固定10min，再用加载液处理20min，在4℃的PVS2玻璃液处理30min，放入液氮中保存；迅速取出放入卸载液中水浴解冻，室温后冲洗、晾干，接入诱导培养基中，接种好的材料先在黑暗条件下34℃热击3d，之后放入16/8h光照，在光强为1500～2000lx和25℃的培养室中进行培养。本发明有效延长了未授粉子房的取样时长，解决了材料供应不足的问题，保存后恢复培养率可高达80%以上，加速了甜瓜单倍体培养的进程。
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