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公开(公告)号：CN106918590A
公开(公告)日：2017-07-04
申请号：CN201510984960.0
申请日：2015-12-25
申请人： 青岛清泉生物科技有限公司
发明人： 褚方强
CPC分类号： G01N21/78 , G01N21/3103
摘要： 本发明涉及一种海绵提取物的生物活性SRB测定方法，步骤如下：(1)取对数期的肿瘤细胞，每孔200μL加入96孔板中，每孔加入不同浓度的样品溶液2μL；(2)37ºC培养17h；(3)离心吸去上清；(4)每孔加入50μL预冷的80%TCA溶液，移入4ºC冰箱中固定1.5h，再用去离子水冲洗5次，室温晾干；(5)每孔加入0.5%SRB染液50μL，室温静置30min后，用预冷的1%TCA水溶液冲洗4次，室温晾干；(6)每孔加入150μL Tris溶液溶解与蛋白结合的染料，用酶标仪在520nm下测定每孔吸光度OD值。按公式IR(%)=(OD空白-OD样品)/OD空白×100%计算细胞增殖抑制率(IR%)。本发明的测定方法简单快速、而且检测结果可靠，适于推广应用。
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公开(公告)号：CN106916198A
公开(公告)日：2017-07-04
申请号：CN201510984984.6
申请日：2015-12-25
申请人： 青岛清泉生物科技有限公司
发明人： 褚方强
IPC分类号： C07J75/00 , C07J9/00 , C07D493/04 , C07C231/24 , C07C233/18 , C07C235/08
CPC分类号： C07J9/00 , C07C231/24 , C07D493/04 , C07C233/18 , C07C235/08
摘要： 本发明涉及一种全面提取肉芝软珊瑚中化学成分的方法，步骤如下：将样品sarcophyton sp.粉碎后，室温下用甲醇冷浸提取3次，每次浸泡3天；合并提取液，减压浓缩，用无水甲醇脱盐三次，得到总浸膏，总浸膏经100-200目的减压硅胶柱层析，石油醚/丙酮梯度洗脱(100:1到1:2,v/v)。将上述洗脱的各段产物进行进一步分离，分离方法包括甲醇/水比例(40%~100%)梯度洗脱，再用半制备HPLC进一步纯化。本发明综合利用TCL、CC、ODS、Sephadex LH-20、HPLC等现代色谱分离技术，提取到的化学成分多，且提取到了未发现过的新成分。
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公开(公告)号：CN106912427A
公开(公告)日：2017-07-04
申请号：CN201510983580.5
申请日：2015-12-24
申请人： 青岛清泉生物科技有限公司
发明人： 褚方强
IPC分类号： A01K61/54
CPC分类号： Y02A40/822
摘要： 一种海湾扇贝的促熟催产方法，步骤如下：（1）挑选外型规则、性腺发育正常、活力好的海湾扇贝个体，洗刷去除亲贝外壳上的附着物，雌雄分开置于养殖池中，养殖池中海水温度为2℃；（2）每日换水一次，新水的水温比前一日升温 0.1~0.2℃；（3）当水温升至7℃后恒温待产，促熟完成；（4）将促熟完成的扇贝取出放置于无光、阴凉、干燥的空气中静置 90min；（5）将雌雄扇贝分别放到桶中，加入12℃的过滤海水进行催产，催产过程通气并定时搅拌，以刺激加快排卵和排精速度。本发明的促熟催产方法简单易操作，促熟催产的成功率高。
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公开(公告)号：CN106912425A
公开(公告)日：2017-07-04
申请号：CN201510983560.8
申请日：2015-12-24
申请人： 青岛清泉生物科技有限公司
发明人： 褚方强
IPC分类号： A01K61/54
CPC分类号： Y02A40/822
摘要： 一种虾夷扇贝的促熟催产方法，步骤如下：（1）挑选外型规则、性腺发育正常、活力好的虾夷扇贝个体，洗刷去除亲贝外壳上的附着物，雌雄分开置于养殖池中，养殖池中海水温度为2℃；（2）每日换水一次，新水的水温比前一日升温 0.1~0.2℃；（3）当水温升至7℃后恒温待产，促熟完成；（4）将促熟完成的扇贝取出放置于无光、阴凉、干燥的空气中静置90min；（5）将雌雄扇贝分别放到桶中，加入12℃的过滤海水进行催产，催产过程通气并定时搅拌，以刺激加快排卵和排精速度。本发明的促熟催产方法简单易操作，促熟催产的成功率高。
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公开(公告)号：CN106912423A
公开(公告)日：2017-07-04
申请号：CN201510984982.7
申请日：2015-12-25
申请人： 青岛清泉生物科技有限公司
发明人： 褚方强
摘要： 本发明涉及一种真江蓠与杂交鲍混养的方法，杂交鲍的密度为400只/池，真江蓠的密度为38.13g/m3，养殖池的规格为180cm×150cm×130cm。所述杂交鲍为皱纹盘鲍与盘鲍的杂交后代，杂交鲍采用网箱养殖，网箱规格为43.5cm×33.5cm×14cm，每笼40只，每5个养殖箱捆在一起，称为一串，每串200只。所述养殖箱放置到海藻培育池中，每池放两串鲍笼。养殖杂交鲍一个星期后，开始引进海藻进行混养，海藻用网罩悬养于池面中央，与鲍笼保持一定的距离，避免杂交鲍食用养殖海藻。本发明研究了我国常见的大型海藻真江蓠与皱纹盘鲍和盘鲍的杂交鲍进行混养的方法，对海藻净化杂交鲍养殖池中的水质以及对杂交鲍生长的影响进行了研究，为进一步选择大型海藻建立新型有效的鲍健康养殖模式提供必要科学依据。
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公开(公告)号：CN106912422A
公开(公告)日：2017-07-04
申请号：CN201510984973.8
申请日：2015-12-25
申请人： 青岛清泉生物科技有限公司
发明人： 褚方强
摘要： 本发明涉及一种浒苔与杂交鲍混养的方法，杂交鲍的密度为400只/池，浒苔的密度为42.17g/m3，养殖池的规格为180cm×150cm×130 cm。所述杂交鲍为皱纹盘鲍与盘鲍的杂交后代，杂交鲍采用网箱养殖，网箱规格为43.5cm×33.5cm×14cm，每笼40只，每5个养殖箱捆在一起，称为一串，每串200只。所述养殖箱放置到海藻培育池中，每池放两串鲍笼。养殖杂交鲍一个星期后，开始引进海藻进行混养，海藻用网罩悬养于池面中央，与鲍笼保持一定的距离，避免杂交鲍食用养殖海藻。本发明研究了我国常见的大型海藻浒苔与皱纹盘鲍和盘鲍的杂交鲍进行混养的方法，对海藻净化杂交鲍养殖池中的水质以及对杂交鲍生长的影响进行了研究，为进一步选择大型海藻建立新型有效的鲍健康养殖模式提供必要科学依据。
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公开(公告)号：CN106900611A
公开(公告)日：2017-06-30
申请号：CN201510959573.1
申请日：2015-12-21
申请人： 青岛清泉生物科技有限公司
发明人： 褚方强
IPC分类号： A01K61/30
CPC分类号： A01K61/00
摘要： 本发明涉及一种刺参的雌核发育诱导方法，采用电刺激法，电刺激前先将卵子移入电刺激缓冲液中平衡2min,调好电脉冲仪参数，用吸管吸取1ml卵子放入电击杯中，即可进行电刺激处理；所述电刺激缓冲液为Zimmerman氏缓冲液，具体成分为：0.1mmol/L Ca(C2H3O2)2H2O，1mmol/L K2HPO4，0.5mmol/L Mg(C2H3O2)2·4H2O，0.1mmol/L还原型谷胱甘肽，1%BSA，0.4mmol/L蔗糖；所述电脉冲仪参数为场强0.78kv/cm，电容5µF，2次电脉冲。所述电刺激时的卵子密度为7×104个/ml。本发明的方法简单有效，经电刺激诱导后，刺参的卵裂率可达到28%以上，胚胎存活率可达到98%以上。
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公开(公告)号：CN106918691A
公开(公告)日：2017-07-04
申请号：CN201510984975.7
申请日：2015-12-25
申请人： 青岛清泉生物科技有限公司
发明人： 褚方强
IPC分类号： G01N33/50
CPC分类号： G01N33/5011
摘要： 本发明涉及一种拟海桑提取物的生物活性SRB测定方法，步骤如下：(1)取对数期的肿瘤细胞，每孔200μL加入96孔板中，每孔加入不同浓度的样品溶液2μL；(2)37ºC培养17h；(3)离心吸去上清；(4)每孔加入50μL预冷的80%TCA溶液，移入4ºC冰箱中固定1.5h，再用去离子水冲洗5次，室温晾干；(5)每孔加入0.5%SRB染液50μL，室温静置30min后，用预冷的1%TCA水溶液冲洗4次，室温晾干；(6)每孔加入150μL Tris溶液溶解与蛋白结合的染料，用酶标仪在520nm下测定每孔吸光度OD值。按公式IR(%)=(OD空白-OD样品)/OD空白×100%计算细胞增殖抑制率(IR%)。本发明的测定方法简单快速、而且检测结果可靠，适于推广应用。
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公开(公告)号：CN106916806A
公开(公告)日：2017-07-04
申请号：CN201510983556.1
申请日：2015-12-24
申请人： 青岛清泉生物科技有限公司
发明人： 褚方强
CPC分类号： Y02A40/824 , C12N13/00 , C12N5/0601
摘要： 本发明涉及一种脊尾白虾的雌核发育诱导方法，采用电刺激法，电刺激前先将卵子移入电刺激缓冲液中平衡2min,调好电脉冲仪参数，用吸管吸取1ml卵子放入电击杯中，即可进行电刺激处理；所述电刺激缓冲液为甘露醇缓冲液，具体成分为：0.05 mmol/L CaCl2，0.1mmol/L MgCl2，0.5 mmol/L Hepes，1%BSA，0.27mmol/L甘露醇；所述电脉冲仪参数为场强1.1kv/cm，电容3 µF，2次电脉冲。所述电刺激时的卵子密度为4.5×104个/ml。本发明的方法简单有效，经电刺激诱导后，脊尾白虾的卵裂率可达到28%以上，胚胎存活率可达到98%以上。
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公开(公告)号：CN106916191A
公开(公告)日：2017-07-04
申请号：CN201510984953.0
申请日：2015-12-25
申请人： 青岛清泉生物科技有限公司
发明人： 褚方强
摘要： 本发明涉及寡聚甘露糖醛酸的制备方法，包括两次水解与分级：（1）一次水解及分级：褐藻胶用少量95%的乙醇分散后，加入10倍水中。加入盐酸使反应体系中酸的浓度为0.5mol/L，然后在100℃下搅拌回流10h，冷却后，将上述水解混合物离心，收集沉淀。将沉淀用水洗涤，加入Na2CO3溶液溶解沉淀，然后调节溶液pH至2.86，离心，沉淀为G1。（2）二次水解及分级：向上清液中加入盐酸，使反应体系中酸的浓度为0.1mol/L。继续加热搅拌回流3h。用Na2CO3溶液中和至沉淀溶解，再用盐酸调节溶液的pH至2.86，离心，向上清液中继续加入稀盐，产生大量沉淀，离心收集沉淀，沉淀用70-75%的乙醇充分洗涤，经95%的乙醇脱水，干燥即得寡聚甘露糖醛酸。本方法可简单快速大量制备高纯度的寡聚甘露糖醛酸。
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