一种L-天冬氨酸β-脱羧酶产生菌的高通量筛选方法

    公开(公告)号:CN105648036B

    公开(公告)日:2020-05-19

    申请号:CN201410654586.3

    申请日:2014-11-17

    IPC分类号: C12Q1/527 C12Q1/04 C12R1/40

    摘要: 本发明公开了一种L‑天冬氨酸β‑脱羧酶产生菌的高通量筛选方法。该方法包括如下步骤:1)采用富集培养基对样品中的微生物进行富集培养与初步分离;2)然后将平板分离得到的单菌落接种96微孔板初筛半固体培养基,初筛得到L‑天冬氨酸β‑脱羧酶产生菌;3)对初筛得到的菌株接种24孔板液体培养,结合纸层析法复筛得到L‑天冬氨酸β‑脱羧酶高产菌株;4)对复筛得到的高产菌株进行摇瓶发酵,结合氧化显色法确认酶活性。本发明方法适用于L‑天冬氨酸β‑脱羧酶产生菌的高通量筛选,筛选的菌株具有耐碱性能,在细胞生产过程中避免了繁琐pH值控制步骤。同时也为同类生物酶产生菌的高通量筛选提供参考。

    小分子共价抑制剂在制备抑制S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶的药物上的应用及筛选方法

    公开(公告)号:CN106389403B

    公开(公告)日:2019-02-19

    申请号:CN201610257321.9

    申请日:2016-04-22

    申请人: 三峡大学

    摘要: 本发明属于生物医学领域,尤其是涉及小分子共价抑制剂在制备抑制S‑腺苷甲硫氨酸脱羧酶的药物上的应用及筛选方法。一种小分子共价抑制剂,其结构式为:其中R1可以为苯基或苯胺或苯甲酰胺或其取代苯基基团、甲基或乙基、呋喃及其取代基团、吡咯及其取代基团、吡啶及其取代基团等;该抑制剂还包括含有通式I所示的化学结构的药学上可接受的盐。筛选S‑腺苷甲硫氨酸脱羧酶的小分子共价抑制剂的方法,为将S‑腺苷甲硫氨酸脱羧酶晶体结构中的丙酮酰68残基删除,并在Rosetta软件中优化,得到优化后的蛋白晶体结构;与搜索得到的小分子结构利用AutoDockVina软件进行对接计算,对计算结果进行筛选,根据打分排序,筛选得到小分子共价抑制剂。