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公开(公告)号：CN106483217A
公开(公告)日：2017-03-08
申请号：CN201610868637.1
申请日：2016-09-30
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
IPC分类号： G01N30/02
CPC分类号： G01N30/02
摘要： 本发明提供一种GC-MS检测新鲜烟叶中初生代谢物和次生代谢物的方法，所述方法步骤如下：快速采集新鲜烟叶并用液氮现场速冻，转移到干冰中低温运回实验室，采用冻干机低温冷冻干燥的方法除去水分，并用粉碎机对烟叶进行粉碎，过40目筛，用溶剂超声提取粉碎后的烟叶中初生次生代谢物，对提取液的上清液进行氮气吹干，然后对吹干的提取物进行肟化反应、硅烷衍生化反应，最后采用GC-MS分析。其优点在于：烟叶采集方法可以真实反映采集烟叶所在的生长发育时期、采集部位、品种和产地。烟叶提取和检测方法可以涵盖新鲜烟叶中初生、次生代谢物，如糖、氨基酸、有机酸、甾醇、生物碱、多酚等，具有高通量检测特性，同时选择离子监测方法可以准确定性定量新鲜烟叶中初生代谢物和次生代谢物199个（标准品验证135个）。
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公开(公告)号：CN105861545A
公开(公告)日：2016-08-17
申请号：CN201610267370.0
申请日：2016-04-27
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
CPC分类号： C12N15/8243 , C12N9/1037 , C12N15/8273 , C12Y203/01074
摘要： 本发明属于植物基因工程领域，涉及一种提高烟草中类黄酮含量并提升烟草抗旱性的方法，具体涉及在烟草K326中过表达查尔酮合成酶（CHS）基因，从而提高烟草中类黄酮含量并提升烟草抗旱性。检测结果表明过表达CHS基因烟草中的类黄酮含量（芦丁、槲皮素、山奈酚苷、紫云英苷、柚皮苷、柚皮素、异甘草素）明显高于对照烟草；干旱处理旺长期烟草14天，通过观察表型、测定相对含水率、测定MDA含量，测定H2O2含量等方法验证转基因烟草的耐旱性，结果表明过表达CHS基因烟草的耐旱性显著强于普通烟草。
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公开(公告)号：CN105699579A
公开(公告)日：2016-06-22
申请号：CN201610267800.9
申请日：2016-04-27
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
CPC分类号： G01N30/88 , G01N30/02 , G01N30/06 , G01N2030/027 , G01N2030/062 , G01N2030/884
摘要： 本发明涉及烟草中类黄酮的检测，具体是一种检测鲜烟叶中多种类黄酮代谢组学方法，其特征在于：采用超声萃取法提取烟叶中的类黄酮成分，通过UPLC-QqQ-MS/MS实现新鲜烟叶中芦丁、槲皮素、柚皮素、山奈酚苷、紫云英苷、柚皮苷、异甘草素的检测。本方法相比现有技术的优点在于：准确度高，灵敏度高，重复性好，适用于植物中这七种类黄酮化合物的同时定量检测，可用于植物类黄酮类物质代谢途径及基因功能研究。
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公开(公告)号：CN105603047A
公开(公告)日：2016-05-25
申请号：CN201511026270.0
申请日：2015-12-31
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
IPC分类号： C12Q1/48
CPC分类号： C12Q1/48
摘要： 本发明公开一种适用于植物全蛋白提取液的GSTs活性分析方法，以植物叶片和根的全蛋白提取液为样品，同时以提取液为对照样，以GSH和CDNB为反应底物，通过测定GS-CDNB偶联产物的量分析GSTs的活性。改进后的方法将CDNB的溶剂由乙醇改为丙酮，大大提高了CDNB的溶解性，在同样CDNB浓度下降低了溶剂的使用量，从而避免了由过量溶剂引起的蛋白变性；同时，改进后的方法增加了谷胱甘肽（GSH）与CDNB的摩尔比，使其更有利于分析GSTs蛋白含量较低的植物全蛋白提取液。
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公开(公告)号：CN105445209A
公开(公告)日：2016-03-30
申请号：CN201511025441.8
申请日：2015-12-31
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
摘要： 本发明公开了一种烟用农药或安全剂筛选的方法，以不同待筛选烟用农药或安全剂喷施烟草，取叶片和根作为样品，同时以未施药的烟草叶片和根为对照样，其特征在于：提取样品和对照样的全蛋白提取液，以GSH和CDNB为反应底物，检测各组全蛋白提取液340nm下的吸光值，计算GS-CDNB偶联产物量，进而确定GSTs活性，筛选能使GSTs活性升高的农药或农药安全剂。该方法具有操作简单、分析快速、高通量的特点，且对仪器要求不高，可以实现对烟用农药的快速筛选，在烟用农药筛选中具有一定的应用价值和经济价值。
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公开(公告)号：CN105385701A
公开(公告)日：2016-03-09
申请号：CN201510989403.8
申请日：2015-12-24
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
CPC分类号： C12N9/104 , C12N15/8261 , C12Y203/02015
摘要： 本发明涉及一种烟草植物螯合肽合成酶基因及其应用，属于生物技术领域，具体涉及烟草镉吸收和分布的关键基因及其在烟草降焦减害领域的应用。本发明利用基因沉默技术构建了NtPCS1基因的干扰载体，成功获得了NtPCS1的K326沉默植株，所获得的沉默植株拥有镉含量相对对照植株明显降低的表型。可见，利用基因沉默技术降低NtPCS1基因的表达能够获得镉含量降低的转基因植株，使得低镉烟草育种成为可能，为降低烟草镉含量提供了一种有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN105237613A
公开(公告)日：2016-01-13
申请号：CN201510773280.4
申请日：2015-11-13
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
IPC分类号： C07K1/14
摘要： 本发明涉及植物蛋白提取，具体是一种非变性植物全蛋白提取液及其制备方法，其特征在于：该提取液是包含有以下成分的水溶液：磷酸缓冲液、EDTA、甘油、聚乙烯吡咯烷酮PVP及蛋白酶抑制剂。本发明的特点在于使用该蛋白提取液提取的植物全蛋白适用于蛋白酶活性的分析及BCA等方法对蛋白浓度的测定。该提取液的特点在于不对蛋白进行变性，不添加影响BCA等测定的还原剂，提取后的蛋白可冷冻保存数月，复融后基本无沉淀，且保存前后蛋白活性基本不受影响，提取的蛋白量较高，还可直接用于进一步分离纯化，因此该提取液在植物生理生化研究方面具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN105130775A
公开(公告)日：2015-12-09
申请号：CN201510401248.3
申请日：2015-07-10
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
摘要： 一种开环西松烷二萜类化合物及其分离制备方法和应用，特征是：该化合物是由烟草中分离纯化而得到，具有如下结构： 命名为Nicotiaditerpene A，是从烟叶中分离的开环西松烷二萜类化合物，经多种现代色谱光谱分析，特别是应用二维核磁共振谱对化合物的结构进行综合解析，确定了该化合物的化学结构及立体构型。经文献检索，该化合物为一新化合物。本发明还发现该化合物对多种肿瘤细胞均有抑制作用。本发明充分利用烟草资源优势，深入研究开发，分离出具有独特化学结构的西松烷二萜类化合物，为开展西松烷二萜类成分相关研究及应用奠定坚实基础，并为研制新的抗肿瘤药物提供新的思路。
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公开(公告)号：CN105018351A
公开(公告)日：2015-11-04
申请号：CN201510401246.4
申请日：2015-07-10
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
摘要： 一种快速分离、鉴定烟草内生真菌的方法，其特征在于：包括烟叶表面消毒、切片培养、菌丝的分离纯化、菌丝DNA的提取、PCR扩增真菌的ITS-rDNA基因、PCR目的片段的测序、序列的比对鉴定等步骤。本发明的特点和意义在于：建立并完善烟草内生真菌的分离、培养与鉴定体系，有助于提供烟草内生真菌与烟草之间相互作用关系及其生物功能的新信息，为系统剖析烟草内生菌的多样性与功能性提供理论依据。本发明的提出对于烟草内生真菌的研究及开发、阐明烟草内生真菌的种类、分布特点，提高烟叶品质具有重要意义。
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公开(公告)号：CN104458682A
公开(公告)日：2015-03-25
申请号：CN201410613314.9
申请日：2014-11-05
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
IPC分类号： G01N21/64
摘要： 一种多功能寡聚核苷酸链用于多种物质的荧光检测方法，被测物质包括寡聚核苷酸链的互补链、凝血酶、Hg2+和L-半胱氨酸四种不同物质，包括以下步骤：⑴配制溶液：a.Tris-HNO3缓冲溶液；b.氧化石墨烯分散液；⑵将荧光探针预热并缓慢冷却到室温；⑶将不同浓度的标准被测物质与荧光探针溶液混合，室温下孵育；⑷加入氧化石墨烯分散液和缓冲溶液，测量荧光发射光谱，根据检测到的荧光信号强度，建立被测物质的标准曲线；⑸将样品溶液代替被测物质进行反应，根据检测的荧光信号强度和对应的标准曲线，得到样品溶液中被测物质含量。本发明优点为：灵敏度高干扰小，选择性好，可达到快速检测互补链、凝血酶、Hg2+和L-半胱氨酸四种不同物质的目的。
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