公开(公告)号：CN110846399B

公开(公告)日：2022-11-04

申请号：CN201910938718.8

申请日：2019-09-30

申请人： 东华大学 ,  上海市松江区中心医院

发明人： 李凯 ,  王斌 ,  肖君华 ,  周宇荀 ,  侯彦强 ,  曹辉

IPC分类号： C12Q1/6883 ,  C12Q1/6858

摘要： 本发明涉及一种心血管疾病个体化用药基因检测体系试剂盒及其应用，包括PCR反应体系、LDR的反应体系。本发明所述试剂盒采用多重PCR技术和多重LDR技术，两种技术相结合，基于杂交反应和连接反应，双重保证，检测过程中无需DNA纯化，减少了污染的可能性，结果更加准确。PCR‑LDR检测的准确度可以与Sanger测序相媲美，但是前者多样性更高、成本更低。

公开(公告)号：CN104170792B

公开(公告)日：2016-06-08

申请号：CN201410397040.4

申请日：2014-08-13

申请人： 东华大学

发明人： 李凯 ,  高遄 ,  晁天柱 ,  徐福意 ,  周宇荀 ,  肖君华

IPC分类号： A01K67/02 ,  C12Q1/68

摘要： 本发明涉及一种基于ZZ2小家鼠来源的1号染色体替换B6-Chr1ZZ2/Xiao小鼠模型的构建方法，包括：将ZZ2小鼠与小鼠C57BL/6J杂交，获得F1代，取F1代小鼠与C57BL/6J回交，获得F2代，通过基因分型筛选出整个1号染色体为杂合状态的小鼠；F2代小鼠与C57BL/6J回交，以相同的方式回交，筛选10代后，形成1号染色体为杂合状态，其余染色体均为纯合C57BL/6J基因型的小鼠群体；鉴定回交小鼠的基因DNA；1号染色体为ZZ2与B6杂合状态的回交小鼠经过10代回交后，育成携带ZZ2小鼠1号染色体的同源基因导入近交系，通过兄妹自交和基因鉴定筛选，即得。

公开(公告)号：CN103937826B

公开(公告)日：2016-04-06

申请号：CN201410136599.1

申请日：2014-04-04

申请人： 东华大学

发明人： 周宇荀 ,  仝莉 ,  李晓宁 ,  肖君华 ,  李凯

IPC分类号： C12N15/66

摘要： 本发明涉及一种中枢神经系统中特异表达miR-505的载体的制备方法，包括：用PCR方法获得目的基因，将GFAP启动子从pAAV-GFAP-hchR2-mcherry-WPRE载体上用合适的限制性内切酶切下，与目的基因连接克隆到pUC19载体上，然后通过合适的酶切位点将GFAP-EGFP-mir-505片段从pUC载体上切下，克隆到PB载体上，获得载体。本发明可与表达转座酶的辅助载体共注射小鼠的受精卵的雄性原核，得到转基因小鼠，用以研究miR-505在神经系统特别是在神经胶质细胞中的包括调控性发育启动在内的生物学功能，并且EGFP蛋白能方便地显示外源基因在神经系统中的定位。

公开(公告)号：CN104651401A

公开(公告)日：2015-05-27

申请号：CN201510098102.6

申请日：2015-03-05

申请人： 东华大学

发明人： 周宇荀 ,  邓倩云 ,  常雪莹 ,  王斯佳 ,  肖君华 ,  李凯

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/113

摘要： 本发明涉及一种mir-505双等位基因敲除的方法，包括：构建两种针对mir-505基因的打靶载体，在哺乳动物细胞中通过CRISPR/Cas系统介导打靶载体对mir-505基因进行替换敲除，利用G418抗性筛选得到mir-505单等位基因敲除细胞，并在该细胞基础上再一次利用CRISPR/Cas系统和绿色荧光打靶载体作用对另一条mir-505进行敲除，通过荧光筛选得到mir-505双等位基因敲除的细胞。本发明为构建基因彻底敲除细胞模型提供帮助，具有良好的应用前景。

公开(公告)号：CN104212836A

公开(公告)日：2014-12-17

申请号：CN201410478757.1

申请日：2014-09-18

申请人： 东华大学

发明人： 邓倩云 ,  周宇荀 ,  常雪莹 ,  王斯佳 ,  肖君华 ,  李凯

IPC分类号： C12N15/85

摘要： 本发明涉及一种在哺乳动物细胞系中敲除mir-505的方法，通过体外合成sgRNA的核苷酸单链，再经过处理得到插入片段，随后将sgRNA利用同源重组或T4连接插入到41824载体中或42230载体中，转化至大肠杆菌的感受态细胞，然后对载体进行菌落PCR检测和测序确认，得到表达载体，通过将PCR产物变性，再退火的方式形成异源杂交双链，利用T7E1酶切试验确定利用CRISPR-Cas9系统对mir-505基因的剪切效率。本发明为如何选择sgRNA表达载体提供参考。

公开(公告)号：CN102586457B

公开(公告)日：2014-04-23

申请号：CN201210067143.5

申请日：2012-03-14

申请人： 东华大学

发明人： 李凯 ,  谢雯 ,  鲍世民 ,  谢建云 ,  姜宪环 ,  蔡慧强

IPC分类号： C12Q1/68

摘要： 本发明涉及一种用于鉴别近交系小鼠的SNP分型方法，包括：(1)遗传标记的选择，平均覆盖21染色体的共45个SNP位点，并对这些位点设计引物和探针；(2)四组多重PCR，每组含10～12对PCR引物；(3)四组多重LDR，每组含10～12个位点特异性探针；(4)产物快速分离鉴定。本发明的SNP分型方案，仅需要45个SNP遗传位标就可用于近交系小鼠的分型和鉴定，不仅能减少反应次数和时间，而且操作简便迅速，能大大节约成本，对其分型和研究具有重要意义，为近交系小鼠的鉴定和分型提供了一种新的方法。

公开(公告)号：CN103725759A

公开(公告)日：2014-04-16

申请号：CN201210382385.3

申请日：2012-10-10

申请人： 上海西普尔-必凯实验动物有限公司 ,  东华大学

发明人： 赵莹 ,  肖君华 ,  邢正弘 ,  陈国强 ,  周宇荀 ,  李凯 ,  赵丽亚 ,  晁天柱 ,  柏熊 ,  高捷

IPC分类号： C12Q1/68

CPC分类号： C12Q1/6888 ,  A01K67/027 ,  C12Q2600/156

摘要： 本发明涉及1号染色体替换野生小家鼠C57BL/6.松江3-Chr1的建立。构建了一种新的染色体C57BL/6替代实验小鼠品系，该小鼠品系的遗传背景以C57BL/6小鼠为主，但其中1号染色体以松江3小鼠为主。本发明的染色体替换品系可用于研究在相同基因组背景下，由不同的1号染色体基因组带来的性状差异，是采用遗传学方法研究染色体基因组功能的有用工具。

公开(公告)号：CN102586457A

公开(公告)日：2012-07-18

申请号：CN201210067143.5

申请日：2012-03-14

申请人： 东华大学

发明人： 李凯 ,  谢雯 ,  鲍世民 ,  谢建云 ,  姜宪环 ,  蔡慧强

IPC分类号： C12Q1/68

摘要： 本发明涉及一种用于鉴别近交系小鼠的SNP分型方法，包括：(1)遗传标记的选择，平均覆盖21染色体的共45个SNP位点，并对这些位点设计引物和探针；(2)四组多重PCR，每组含10～12对PCR引物；(3)四组多重LDR，每组含10～12个位点特异性探针；(4)产物快速分离鉴定。本发明的SNP分型方案，仅需要45个SNP遗传位标就可用于近交系小鼠的分型和鉴定，不仅能减少反应次数和时间，而且操作简便迅速，能大大节约成本，对其分型和研究具有重要意义，为近交系小鼠的鉴定和分型提供了一种新的方法。

公开(公告)号：CN101250586A

公开(公告)日：2008-08-27

申请号：CN200810034461.5

申请日：2008-03-11

申请人： 东华大学

发明人： 于明辉 ,  王剑晖 ,  范忠鹏 ,  李凯 ,  陆炯 ,  肖君华

IPC分类号： C12Q1/68

摘要： 本发明涉及一种微量DNA检测的方法，一种通过利用乙醇沉淀回收PCR扩增后的原始DNA模板来重复利用，以克服模板不足的方法，可用于法医学、古生物学、产前诊断遗传学检测与疾病基因组学的研究等这些DNA样本比较少的领域。与以往检测微量DNA的方法相比，本发明从起始模板的角度来解决微量DNA的检测，且整个检测方案操作过程简单，不需要专业人员，特异性高，并且灵敏度与PCR效率都很高，在实际应用中有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN101078028A

公开(公告)日：2007-11-28

申请号：CN200710038929.3

申请日：2007-03-30

申请人： 东华大学

发明人： 贺明星 ,  李凯 ,  肖君华 ,  周宇荀

IPC分类号： C12Q1/68

摘要： 本发明涉及一种两次bio－bar－code核酸检测技术，步骤包括：(1)磁珠探针、待测DNA和第一组纳米金探针混合，杂交；(2)分离磁珠，洗涤，加洗脱液，继续保温杂交，磁分离，洗涤；(3)重新悬浮沉淀，加入第二组纳米金探针，混合，杂交；(4)分离磁珠，洗涤，加洗脱液，去磁珠，检测上清液。该方法操作简单，特异性和灵敏度较高，易于自动化，有广泛的应用前景。