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公开(公告)号：CN103937826A
公开(公告)日：2014-07-23
申请号：CN201410136599.1
申请日：2014-04-04
申请人： 东华大学
IPC分类号： C12N15/66
摘要： 本发明涉及一种中枢神经系统中特异表达miR-505的载体的制备方法，包括：用PCR方法获得目的基因，将GFAP启动子从pAAV-GFAP-hchR2-mcherry-WPRE载体上用合适的限制性内切酶切下，与目的基因连接克隆到pUC19载体上，然后通过合适的酶切位点将GFAP-EGFP-mir-505片段从pUC载体上切下，克隆到PB载体上，获得载体。本发明可与表达转座酶的辅助载体共注射小鼠的受精卵的雄性原核，得到转基因小鼠，用以研究miR-505在神经系统特别是在神经胶质细胞中的包括调控性发育启动在内的生物学功能，并且EGFP蛋白能方便地显示外源基因在神经系统中的定位。
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公开(公告)号：CN103937826B
公开(公告)日：2016-04-06
申请号：CN201410136599.1
申请日：2014-04-04
申请人： 东华大学
IPC分类号： C12N15/66
摘要： 本发明涉及一种中枢神经系统中特异表达miR-505的载体的制备方法，包括：用PCR方法获得目的基因，将GFAP启动子从pAAV-GFAP-hchR2-mcherry-WPRE载体上用合适的限制性内切酶切下，与目的基因连接克隆到pUC19载体上，然后通过合适的酶切位点将GFAP-EGFP-mir-505片段从pUC载体上切下，克隆到PB载体上，获得载体。本发明可与表达转座酶的辅助载体共注射小鼠的受精卵的雄性原核，得到转基因小鼠，用以研究miR-505在神经系统特别是在神经胶质细胞中的包括调控性发育启动在内的生物学功能，并且EGFP蛋白能方便地显示外源基因在神经系统中的定位。
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公开(公告)号：CN104372083B
公开(公告)日：2016-11-16
申请号：CN201410606864.8
申请日：2014-10-31
申请人： 东华大学
IPC分类号： C12Q1/68
摘要： 本发明涉及一种逆转录miR‑505的茎环引物的设计方法，包括：以miRNA‑505‑3P基因为特异性的转录本，分别将该逆转录茎环引物的茎部碱基对的数量和环部的碱基个数规律的设计对应的几个梯度，经过对miRNA‑505‑3P的逆转录和real time‑PCR检测，最终筛选出一个对于miRNA‑505‑3P基因特异性逆转录时效率最佳的逆转录茎环引物。本发明避免了对成熟体检测的干扰，通过茎环引物在茎部和环部的梯度性的调整，可以分别明确的看出环部碱基的结构和茎部碱基的结构分别对逆转录茎环引物的逆转录效率的影响，因此更容易设计出合理高效的逆转录引物。
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公开(公告)号：CN105177126A
公开(公告)日：2015-12-23
申请号：CN201510520015.5
申请日：2015-08-21
申请人： 东华大学
IPC分类号： C12Q1/68
CPC分类号： C12Q1/6888 , C12Q1/686 , C12Q2600/158 , C12Q2600/178 , C12Q2545/101 , C12Q2563/107 , C12Q2565/125
摘要： 本发明涉及一种利用荧光PCR技术对小鼠的分型鉴定方法，利用荧光PCR引物，经PCR扩增后将产物与已知片段大小的ROX混合，利用377测序，使用Genemapper软件计算出PCR产物的大小，从而达到鉴定小鼠基因型的目的，即可。本发明简单直接准确的鉴定出Crispr/Cas9敲除的mircoRNA小鼠。
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公开(公告)号：CN105177126B
公开(公告)日：2018-12-04
申请号：CN201510520015.5
申请日：2015-08-21
申请人： 东华大学
IPC分类号： C12Q1/6888 , C12Q1/686
摘要： 本发明涉及一种利用荧光PCR技术对小鼠的分型鉴定方法，利用荧光PCR引物，经PCR扩增后将产物与已知片段大小的ROX混合，利用377测序，使用Genemapper软件计算出PCR产物的大小，从而达到鉴定小鼠基因型的目的，即可。本发明简单直接准确的鉴定出Crispr/Cas9敲除的mircoRNA小鼠。
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公开(公告)号：CN104372083A
公开(公告)日：2015-02-25
申请号：CN201410606864.8
申请日：2014-10-31
申请人： 东华大学
IPC分类号： C12Q1/68
摘要： 本发明涉及一种逆转录miR-505的茎环引物的设计方法，包括：以miRNA-505-3P基因为特异性的转录本，分别将该逆转录茎环引物的茎部碱基对的数量和环部的碱基个数规律的设计对应的几个梯度，经过对miRNA-505-3P的逆转录和real time-PCR检测，最终筛选出一个对于miRNA-505-3P基因特异性逆转录时效率最佳的逆转录茎环引物。本发明避免了对成熟体检测的干扰，通过茎环引物在茎部和环部的梯度性的调整，可以分别明确的看出环部碱基的结构和茎部碱基的结构分别对逆转录茎环引物的逆转录效率的影响，因此更容易设计出合理高效的逆转录引物。
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公开(公告)号：CN104215471A
公开(公告)日：2014-12-17
申请号：CN201410469178.0
申请日：2014-09-15
申请人： 东华大学
IPC分类号： G01N1/06
摘要： 本发明涉及一种microRNA原位杂交的冰冻切片的制备方法，包括：载玻片洁净处理，然后取洁净的载玻片，朝上面标记，滴加200ul浓度为0.1mg/ml多聚赖氨酸工作液；另取载玻片标记面向下，在注有溶液的载玻片上从一端相互反向将溶液推向另一端，直至标记处停止，平放，烘干，干燥后分开，得到防脱玻片；用冰冻切片包埋剂预先浸润组织表面，固定到切片托上，冷冻腔放置，待组织块至表面白色，全部冷冻后放入切片机冷冻夹上进行切片，即得。本发明中玻片易于标准化制作，操作简单，节约试剂，切片制作参数固定，特征明显，易于学习。
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