复制缺陷型重组腺病毒Ad41载体系统及其应用

    公开(公告)号:CN101619324A

    公开(公告)日:2010-01-06

    申请号:CN200810126855.3

    申请日:2008-07-01

    IPC分类号: C12N15/861 C12N5/10 C12N7/01

    摘要: 本发明涉及基因治疗和重组疫苗领域中一种复制缺陷型重组腺病毒Ad41载体系统及其应用。具体而言,本发明提供的载体系统包括1个骨架质粒、1个穿梭质粒和1个包装细胞系,其中所述骨架质粒含有缺失了腺病毒包装所需编码区的腺病毒Ad41基因组,所述穿梭质粒含有用于插入目的基因的多克隆位点以及用于与骨架质粒发生同源重组的腺病毒Ad41基因组片段,所述包装细胞系在细胞基因组中整合了所述腺病毒Ad41包装所需基因并能稳定表达该包装基因。本发明产生的重组Ad41病毒在肠道基因治疗和口服重组疫苗研究中有广阔的应用前景。

    一种复制型鼠1型腺病毒MAdV-1载体系统及其应用

    公开(公告)号:CN118272440A

    公开(公告)日:2024-07-02

    申请号:CN202410488456.0

    申请日:2024-04-23

    摘要: 本发明提供一种复制型鼠1型腺病毒MAdV‑1载体系统,包括腺病毒质粒pKMAV1‑IXCG。外源基因表达框可通过DNA组装或限制性酶切‑连接克隆插入pKMAV1‑IXCG质粒的两个BstZ17I限制性内切酶切割位点之间,产生携带外源基因表达框的腺病毒质粒。将PmeI线性化的腺病毒质粒转染小鼠细胞系,例如NIH/3T3细胞,拯救重组病毒;小鼠细胞系,例如NIH/3T3细胞,能够用于扩增重组病毒。产生的重组病毒含有全部MAdV‑1基因组序列,是复制型病毒;外源基因表达框位于相邻病毒基因pIX、IVa2编码区之间。MAdV‑1不能在人类感染传播,人类缺乏对MAdV‑1的预存免疫力;复制型MAdV‑1载体感染人类细胞时,病毒基因组发生复制,但不产生活性病毒颗粒,有利于外源基因的高效表达;预计本载体系统在基因治疗和载体疫苗领域有广阔的应用前景。

    腺病毒载体系统及重组腺病毒构建方法

    公开(公告)号:CN109295096B

    公开(公告)日:2021-09-14

    申请号:CN201811262788.8

    申请日:2018-10-29

    摘要: 提供一套腺病毒载体系统及重组病毒构建方法。载体系统包括腺病毒质粒pKAd5f11p‑EF1aP、pKAd5f11pES‑PmeI和穿梭质粒pUC19‑PM。腺病毒质粒含E1/E3缺失人5型腺病毒HAdV‑5基因组,原HAdV‑5fiber由HAdV‑5和HAdV‑11p融合基因F5‑11p替代;PmeI位点为外源基因插入部位。pKAd5f11p‑EF1aP含人EF1a启动子。穿梭质粒pUC19‑PM可与pKAd5f11pES‑PmeI配套使用。构建方法包括:PCR扩增两侧含有同源重叠区的目的基因,与PmeI线性化的腺病毒质粒进行DNA组装,得到含目的基因腺病毒质粒;或者将外源基因片段克隆到穿梭质粒,内切酶切下后与PmeI线性化的pKAd5f11pES‑PmeI进行DNA组装。本发明将限制性酶切与DNA组装技术相结合,充分简化了腺病毒载体构建过程。