运用PCR引物检测雀麦上雀麦腥黑粉菌的方法

    公开(公告)号:CN101328495B

    公开(公告)日:2011-06-08

    申请号:CN200810053815.0

    申请日:2008-07-11

    IPC分类号: C12Q1/04 C12Q1/68 C12N15/11

    摘要: 本发明涉及运用PCR引物检测雀麦(Bromus spp.L)上雀麦腥黑粉菌(Tilletia bromi)的方法,属于禾本科草种病原真菌检测领域。本发明设计合成了4套引物,包括通用外套引物、通用内套引物、T.bromi的外套引物和特异引物。通用外套引物用于Tilletia属菌丝基因组DNA或冬孢子套式扩增,通用内套引物用于Tilletia属冬孢子的套式扩增,这两套引物用于扩增过程质量监测,避免检测过程中的假阴性。设计T.bromi区别于T.controversa、T.caries和T.fusca的特异引物,可用于菌丝基因组DNA常规PCR和冬孢子套式PCR特异扩增,外套引物与特异引物套式扩增冬孢子DNA。本发明建立了一种快速简便、特异性强、灵敏度高、准确可靠的雀麦上T.bromi的分子检测方法,一个工作日内完成整个检测。

    运用PCR引物检测雀麦上雀麦腥黑粉菌的方法

    公开(公告)号:CN101328495A

    公开(公告)日:2008-12-24

    申请号:CN200810053815.0

    申请日:2008-07-11

    IPC分类号: C12Q1/04 C12Q1/68 C12N15/11

    摘要: 本发明涉及运用PCR引物检测雀麦(Bromus spp.L)上雀麦腥黑粉菌(Tilletia bromi)的方法,属于禾本科草种病原真菌检测领域。本发明设计合成了4套引物,包括通用外套引物、通用内套引物、T.bromi的外套引物和特异引物。通用外套引物用于Tilletia属菌丝基因组DNA或冬孢子套式扩增,通用内套引物用于Tilletia属冬孢子的套式扩增,这两套引物用于扩增过程质量监测,避免检测过程中的假阴性。设计T.bromi区别于T.controversa、T.caries和T.fusca的特异引物,可用于菌丝基因组DNA常规PCR和冬孢子套式PCR特异扩增,外套引物与特异引物套式扩增冬孢子DNA。本发明建立了一种快速简便、特异性强、灵敏度高、准确可靠的雀麦上T.bromi的分子检测方法,一个工作日内完成整个检测。

    单条植物线虫核糖体内部转录间隔区序列套式PCR扩增方法

    公开(公告)号:CN101230343A

    公开(公告)日:2008-07-30

    申请号:CN200810052041.X

    申请日:2008-01-10

    IPC分类号: C12N15/10 C12N15/30 C12Q1/04

    摘要: 本发明涉及套式PCR技术扩增单条植物寄生线虫核糖体rDNA转录间隔区(Internal Transcribed Spacer,ITS)的核酸序列,属于植物寄生线虫检测领域。本发明筛选了3条引物,建立了套式PCR扩增技术,包括2套不同的PCR扩增体系和2套不同的PCR扩增程序,免去了引物大量合成的成本和管理保存的麻烦。本发明的有益效果是:所涉及的技术成熟、操作简单,所用引物少,目前只有3条就基本解决问题,与实时荧光PCR技术相比,该技术成本低,操作简单,可重复性强,假阳性结果出现概率低,可用于单条植物寄生线虫幼虫或通过常规PCR无法扩增的单条植物寄生线虫ITS核酸序列的扩增。非常适合于口岸日常检疫鉴定使用。