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公开(公告)号：CN110066801B
公开(公告)日：2021-01-29
申请号：CN201910358649.3
申请日：2019-04-30
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N1/21 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌中唾液酸诱导表达元件及构建方法，属于遗传工程领域。本发明以pHT质粒为载体，在枯草芽孢杆菌中，PydjO启动子表达转录调控蛋白NanR，进一步在强启动子Pveg中整合NanR识别结合序列，并关联绿色荧光蛋白GFP，在发酵培养基中添加唾液酸进行发酵验证，成功构建枯草芽孢杆菌中唾液酸诱导表达元件，使其诱导表达强度达到4000a.u.，在不添加唾液酸的情况下，泄漏量为10％，为进一步优化枯草芽孢杆菌中唾液酸诱导表达元件奠定了基础。
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公开(公告)号：CN106929461B
公开(公告)日：2020-11-03
申请号：CN201710277428.4
申请日：2017-04-25
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/75 , C12P19/26 , A23L33/135 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种提高N‑乙酰神经氨酸产量的枯草芽孢杆菌，属于遗传工程领域。本发明是以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis 168ΔnagPΔnagPΔgamPΔgamAΔnagAΔnagBΔ1dhΔpta::lox72；Δctc::p43‑Gna1，pP43NMK‑AGE‑NeuB)作为表达宿主，通过敲除磷酸转移酶系统葡萄糖特异性酶EIICBA组件ptsG，增加N‑乙酰神经氨酸合成途径中磷酸烯醇式丙酮酸的供给，加强合成途径，本发明的重组枯草芽孢杆菌与出发菌株相比，其N‑乙酰神经氨酸产量从190mg/L提高到660mg/L，为进一步代谢工程改造枯草芽孢杆菌生产N‑乙酰神经氨酸奠定了基础。
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公开(公告)号：CN110129353A
公开(公告)日：2019-08-16
申请号：CN201910367722.3
申请日：2019-05-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种葡萄糖酸盐响应元件及其应用，属于遗传工程领域。本发明以pHT质粒为载体，在枯草芽孢杆菌中，通过优化GntR诱导调控蛋白碱基序列，解除葡萄糖分解代谢阻遏效应，通过在启动子PsrfAA、Phbs、Pveg、PytxG、PphrK、PminC，中整合GntR转录调控蛋白结合序列，并关联绿色荧光蛋白GFP，构建优化葡萄糖酸盐响应元件文库，在发酵培养基中添加葡萄糖酸钠进行发酵验证，获得葡萄糖酸盐响应强度范围为2000～32000a.u.的诱导启动子文库，适用于不同表达强度的应用场景，具有很好的代谢工程应用前景。
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公开(公告)号：CN110129353B
公开(公告)日：2022-09-27
申请号：CN201910367722.3
申请日：2019-05-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种葡萄糖酸盐响应元件及其应用，属于遗传工程领域。本发明以pHT质粒为载体，在枯草芽孢杆菌中，通过优化GntR诱导调控蛋白碱基序列，解除葡萄糖分解代谢阻遏效应，通过在启动子PsrfAA、Phbs、Pveg、PytxG、PphrK、PminC，中整合GntR转录调控蛋白结合序列，并关联绿色荧光蛋白GFP，构建优化葡萄糖酸盐响应元件文库，在发酵培养基中添加葡萄糖酸钠进行发酵验证，获得葡萄糖酸盐响应强度范围为2000～32000a.u.的诱导启动子文库，适用于不同表达强度的应用场景，具有很好的代谢工程应用前景。
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公开(公告)号：CN110093366B
公开(公告)日：2022-09-27
申请号：CN201910368345.5
申请日：2019-05-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌葡萄糖酸盐诱导表达元件及构建方法，属于遗传工程领域。本发明以组成型启动子PlytE表达转录调控蛋白GntR，进一步通过在组成型启动子PthrS中，整合转录调控蛋白GntR结合序列，实现以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168为宿主时，添加葡萄糖酸盐后，达到较高强度的诱导表达水平和较低的泄漏表达水平，其诱导表达强度达到22500a.u.，泄漏量从15.6％降低至3.0％，为筛选基因工程菌或调控蛋白表达奠定了基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111411066B
公开(公告)日：2022-08-23
申请号：CN202010238266.5
申请日：2020-03-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种双途径复合产神经氨酸枯草芽孢杆菌及构建方法，属于遗传工程领域。本发明通过将N‑乙酰神经氨酸合酶和N‑乙酰神经氨酸醛缩酶同时整合到基因组上表达，并选取3个不同强度启动子对NeuB和NanA基因进行表达量优化，最终产量在摇瓶中达到了8.3g/L，为进一步提高枯草芽孢杆菌N‑乙酰神经氨酸产量奠定了基础。
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公开(公告)号：CN111411065B
公开(公告)日：2022-07-05
申请号：CN202010237111.X
申请日：2020-03-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于人工双碳源的产N‑乙酰神经氨酸的重组菌，属于遗传工程领域。本发明通过在枯草芽孢杆菌中以启动子P6过表达甘油激酶，并强化氨基葡萄糖‑6‑磷酸‑N‑乙酰基转移酶和N‑乙酰氨基葡萄糖异构酶，使重组枯草芽孢杆菌可以葡萄糖和甘油双碳源生长、合成，并提高N‑乙酰神经氨酸的产量，使摇瓶水平下的产量提高至8.7g/L。
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公开(公告)号：CN113684202A
公开(公告)日：2021-11-23
申请号：CN202110957544.7
申请日：2021-08-17
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明公开了一种安全无毒的高通量无缝构建质粒的方法，属于遗传工程领域。本发明通过优化组装溶液成分，排除现有方法中存在有毒试剂二硫苏糖醇，以及DNA聚合酶、DNA连接酶、NAD等较昂贵的试剂。由于不需要DNA纯化操作，使得该方法适用于基于96孔PCR板或96孔酶标板等的高通量操作平台。同时，太极组装4个片段构建质粒时，拥有95％以上的阳性率，在高通量构建质粒实验中，可以省略菌落PCR验证步骤，进一步简化高通量质粒构建流程。
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公开(公告)号：CN111394410A
公开(公告)日：2020-07-10
申请号：CN202010238268.4
申请日：2020-03-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高催化活性神经氨酸合酶及应用，属于遗传工程领域。本发明通过筛选不同来源的N-乙酰神经氨酸合酶，并以5个不同强度启动子优化N-乙酰神经氨酸合酶在基因组上的表达水平，将最佳表达强度的NeuB整合到可以合成NeuAc前体物质ManNAc的菌株中，提高了枯草芽孢杆菌的N-乙酰神经氨酸产量使N-乙酰神经氨酸在摇瓶中产量达到7.6g/L。
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公开(公告)号：CN106929461A
公开(公告)日：2017-07-07
申请号：CN201710277428.4
申请日：2017-04-25
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/75 , C12P19/26 , A23L33/135 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种提高N‑乙酰神经氨酸产量的枯草芽孢杆菌，属于遗传工程领域。本发明是以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis 168ΔnagP ΔnagP ΔgamP ΔgamA ΔnagA ΔnagB Δ1dh Δpta::lox72；Δctc::p43‑Gna1，pP43NMK‑AGE‑NeuB)作为表达宿主，通过敲除磷酸转移酶系统葡萄糖特异性酶EIICBA组件ptsG，增加N‑乙酰神经氨酸合成途径中磷酸烯醇式丙酮酸的供给，加强合成途径，本发明的重组枯草芽孢杆菌与出发菌株相比，其N‑乙酰神经氨酸产量从190mg/L提高到660mg/L，为进一步代谢工程改造枯草芽孢杆菌生产N‑乙酰神经氨酸奠定了基础。
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