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公开(公告)号：CN119876077A
公开(公告)日：2025-04-25
申请号：CN202411890789.2
申请日：2024-12-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种合成单链DNA的T7RNA聚合酶突变体及其筛选方法与应用，属于酶工程技术领域。本发明提供了一种T7RNA聚合酶突变体的定向进化和筛选的方法，首先在底盘菌株基因组中敲除核酸外切酶和错配修复蛋白，敲入单链退火蛋白、含有缺失突变的抗性基因和单链DNA合成模板，构建得到用于筛选的基因工程菌，之后构建T7RNA聚合酶突变体文库，将带有突变体文库的重组质粒转入工程菌中，T7RNA聚合酶突变体合成单链DNA修复抗性基因的缺失突变，使转化后的工程菌能够在抗性平板上生长，经过多轮筛选得到的T7RNA聚合酶突变体经体外验证能够高效合成单链DNA，为单链DNA的合成提供了一种全新的工具，具有应用于基因编辑和进化工程等领域的潜力。
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公开(公告)号：CN119552790A
公开(公告)日：2025-03-04
申请号：CN202411740156.3
申请日：2024-11-29
IPC: C12N1/21 , C12N15/54 , C12N15/60 , C12N9/12 , C12N9/88 , C12N15/31 , C07K14/21 , C12N15/70 , C12N15/90 , C12P19/26 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种产N‑乙酰神经氨酸的重组大肠杆菌及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明通过敲除6‑磷酸果糖激酶、甘油激酶引入甘油激酶突变体、用葡萄糖促进扩散转运蛋白替换PTS磷酸转移酶I并进行启动子优化，使重组大肠杆菌可以葡萄糖和甘油双碳源生长、合成N‑乙酰神经氨酸同时乙酸生成量极低。在此基础上，本发明又敲除了6‑磷酸果糖激酶编码基因pfkB，引入来自运动假单胞杆菌的异源ED途径，并通过拷贝数优化和RBS强度优化，使孔板水平下的产量进一步提升达到9.44g/L。
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公开(公告)号：CN117778442B
公开(公告)日：2024-08-09
申请号：CN202311834611.1
申请日：2023-12-28
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/81 , C12N15/113 , C12N15/55 , C12N1/19 , C12R1/865
Abstract: 本发明公开了一种可同时实现CRISPR激活和CRISPR干扰的表达系统及其应用，其中，表达系统包括第一表达框、第二表达框以及第三表达框，第一表达框中含有在非转录因子结合区域插入NCS序列的第一启动子，用于基因表达的激活，第二表达框中含有第二启动子以及位于基因起始密码子之后的NCS序列，用于基因表达的抑制，第三表达框中设置有dCas蛋白突变体以及用于靶向NCS序列的sgRNA。该系统可以同时靶向工程化的启动子，从而产生激活和抑制的效果，利用2个sgRNA同时产生对4个或者更多个基因的调控。
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公开(公告)号：CN118291462A
公开(公告)日：2024-07-05
申请号：CN202410360601.7
申请日：2024-03-27
IPC: C12N15/113 , C07K14/77 , C12N15/72 , C12N1/21 , C12R1/19
Abstract: 本发明涉及一种产卵清蛋白的重组大肠杆菌及其构建方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明以大肠杆菌Nissle 1917为出发菌株，敲除其内源质粒pMUT1，在其内源质粒pMUT2中引入中拷贝复制子p15A、乳糖操纵子和外源卵清蛋白编码基因，使用sigma因子结合位点sigma24串联PP5和Ptac启动子用于增强卵清蛋白的表达，并替换了原启动子的RBS序列，经过上述构建方法得到了一株可在无抗生素条件下生产卵清蛋白的重组大肠杆菌，结合指数补料和DO‑stat正向反馈补料策略，使卵清蛋白产量达到3.7g/L，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN118222473A
公开(公告)日：2024-06-21
申请号：CN202410458064.X
申请日：2024-04-17
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种产5’‑肌苷酸的大肠杆菌及其构建方法与应用，属于生物工程技术领域。本发明提供的产5’‑肌苷酸的大肠杆菌的构建借助CRISPR/Cas9的方法，过程包括强化前体PRPP的供应，解除磷酸核糖焦磷酸激酶受到的反馈抑制，解除谷氨酸胺磷酸核糖焦磷酸转酰胺酶受到的反馈抑制，解除阻遏蛋白的转录抑制，下调竞争途径通量，强化前体PRPP的供应和应用，构建出的重组大肠杆菌以葡萄糖为底物，发酵培养48h后5’‑肌苷酸的产量达到780.66mg/L，与出发菌株相比产量提升，具有良好的工业化生产前景，实现了以葡萄糖为底物的5’‑肌苷酸稳定生产。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118207147A
公开(公告)日：2024-06-18
申请号：CN202410458792.0
申请日：2024-04-17
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种高效生产5’‑肌苷酸的大肠杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。为了减少大肠杆菌中5’‑肌苷酸的降解，通过CRISPR/Cas9系统进行了四个磷酸酶编码基因的敲除验证，并发现分别敲除UMP磷酸酶编码基因nagD和5’‑核苷酸酶编码基因ushA能够提升5’‑肌苷酸产量，之后为了抑制5’‑肌苷酸进一步转化成鸟苷酸和腺苷酸，单独敲除5’‑肌苷酸脱氢酶编码基因guaB，最终为了强化嘌呤合成过程中所需的甲酰基四氢叶酸的供给和利用，替换丝氨酸羟甲基转移酶编码基因glyA的启动子为Ptac，得到的重组大肠杆菌48h发酵5’‑肌苷酸产量达到2113.12mg/L，且发酵过程不需要添加抗生素，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN116790393B
公开(公告)日：2024-05-31
申请号：CN202310742722.3
申请日：2023-06-21
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种改造酿酒酵母菌以葡萄糖为底物合成活性VD3的方法，属于生物技术领域。本发明通过导入DHCR24，强化ERG1，ERG11，tHMG1，ERG7，ERG2，敲除ERG6基因，并通过导入不同的羟化酶确定最合适的维生素D3羟化酶，发现在酵母中VDH无需提供额外的电子传递链便可以发挥作用，将合成的VD3转化为25‑OH‑VD3，并且合成25‑OH‑VD3的量是suaC的5倍。在以葡萄糖为底物的发酵生产中，最终合成5.02mg/L的活性体25‑OH‑VD3，解决了现有技术中仅能以VD3作为底物转化活性体25‑OH‑VD3的问题。
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公开(公告)号：CN118064341A
公开(公告)日：2024-05-24
申请号：CN202410229553.8
申请日：2024-02-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种合成乳酰‑N‑新四糖的无质粒重组大肠杆菌及其应用，属于代谢工程技术领域。本发明基于蛋白组装支架PDZ和SH3，连接表达β‑1,3‑N‑乙酰氨基葡萄糖氨基转移酶LgtA和β‑1,4‑半乳糖基转移酶LgtB，并将其在基因组位点进行整合表达，最终构建合成乳酰‑N‑新四糖的无质粒重组大肠杆菌。乳酰‑N‑新四糖的摇瓶产量达到1.99g/L，在不含有机氮源并以葡萄糖和乳糖作为碳源的培养基进行发酵时，乳酰‑N‑新四糖在3‑L发酵罐中的产量达到23.73g/L，为乳酰‑N‑新四糖的高效合成和进一步的产业化奠定了基础。
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公开(公告)号：CN117887600A
公开(公告)日：2024-04-16
申请号：CN202410170208.1
申请日：2023-07-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种低乙醇合成量酿酒酵母及其在促进乙酰辅酶A合成中的应用，属于生物技术领域。本发明为降低酿酒酵母中主要的副产物乙醇的积累量，同时增加乙酰辅酶A的合成量，对MTH1、MED2和HXT2转录因子进行改造，筛选得到降低乙醇合成量的最优转录因子组合，再对整合在酿酒酵母基因组上的不同合成途径的异源的乙酰辅酶A合成途径进行比较，提供了一种重组酿酒酵母菌株。该菌株可实现以葡萄糖为碳源的无菌培养基中生长，为代谢工程改造酿酒酵母合成高价值化合物搭建了平台，且构建方法简单，便于使用，具有很好地应用前景。
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公开(公告)号：CN114836459B
公开(公告)日：2024-01-26
申请号：CN202210265192.3
申请日：2022-03-17
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/75 , C12N15/113 , C12N15/62
Abstract: 本发明涉及一种胞嘧啶碱基编辑系统及其应用，胞嘧啶碱基编辑系统包括氨基酸序列如SEQ ID NO.1‑3所示的序列之一的融合蛋白，并基于该融合蛋白设计构建了一种枯草芽孢杆菌胞嘧啶碱基编辑系统。本发明构建的胞嘧啶碱基编辑系统解决了现有的胞嘧啶碱基编辑器在基因组上的可操作范围受限，且在多位点的碱基编辑(C→T)过程中效率低且操作复杂的问题，实现了快速高效地在基因组上对多个位点进行编辑。(56)对比文件Li X et al. .Base editing with aCpf1–cytidine deaminase fusion《.Naturebiotechnology》.2018,第36卷(第4期),第324-327页.
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