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公开(公告)号：CN120005846A
公开(公告)日：2025-05-16
申请号：CN202411970882.4
申请日：2024-12-30
Applicant: 江南大学 , 山东金城生物药业有限公司
IPC: C12N9/10 , G16C20/70 , G16C20/10 , G06F18/24 , G06F18/214 , G06F17/16 , G06F17/18 , G06N20/00 , C12N15/54 , C12P19/56
Abstract: 本发明涉及一种提高UDP糖基转移酶催化活性的改造方法及改造所得突变体，属于酶工程技术领域。本发明通过建立UDP糖基转移酶同源空间结构模型，对出发酶的限速区域进行切割，并对切割后的区域进行随机嵌合，得到嵌合酶序列空间，通过贪心算法在序列空间中确定信息量最大的初始序列，通过多轮迭代结合体外验证，得到具有最高酶活性的迭代序列作为最优酶核苷酸序列，该方法改造得到最优UDP糖基转移酶突变体催化活性为出发酶的2.26倍，能够应用于以莱鲍迪苷A为底物生产莱鲍迪苷D，在促进了莱鲍迪苷D工业化生产的同时，为酶的改造和高通量筛选提供了全新的方法和思路，在相关化合物生产领域展现出重要价值和广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN119753083A
公开(公告)日：2025-04-04
申请号：CN202411949322.0
申请日：2024-12-27
Applicant: 江南大学
IPC: C12Q1/10 , C12Q1/48 , C12Q1/6897 , C12N9/10 , C12N15/54 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12P19/18 , C12P19/00 , C12R1/19
Abstract: 本发明涉及一种α‑1,2‑岩藻糖基转移酶的高通量筛选方法及筛选得到的突变体，属于酶工程技术领域。本发明提供一种α‑1,2‑岩藻糖基转移酶高通量筛选方法，步骤包括构建2’‑岩藻糖基乳糖的指示菌株，使2’‑岩藻糖基乳糖的含量与荧光强度呈正相关，之后在底盘菌株中表达L‑岩藻糖激酶和α‑1,2‑岩藻糖基转移酶突变体文库，将底盘菌株进行油包水液滴包埋并将其与指示菌株融合共培养，通过液滴微流控分选根据荧光检测结果得到包含α‑1,2‑岩藻糖基转移酶正向突变体的底盘菌株，其中突变体FutCV93I的酶活为原始酶的2.31倍，酶活力得到极大提升。使用本发明提供的方法，能够对α‑1,2‑岩藻糖基转移酶进行高通量筛选，有利于2’‑岩藻糖基乳糖的工业化生产及其在食品和医药等领域的大规模应用推广。
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公开(公告)号：CN119752957A
公开(公告)日：2025-04-04
申请号：CN202411946161.X
申请日：2024-12-27
Applicant: 江南大学 , 山东润德生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种基于棒状杆菌内源重组酶的谷氨酸棒杆菌基因编辑工具及其应用，属于基因编辑技术领域。为了解决非模式菌株基因编辑效率低下的问题，本发明以C.glutamicum S9114为例，构建了以cpf1为基础的高效基因编辑工具，具体地：由于目前谷氨酸棒杆菌没有兼容性较好的基因编辑重组酶，且缺少效率良好的编辑系统，本发明通过blast迭代法进行筛选，为该菌株的基因编辑提供了一种来自C.aurimucosum ATCC 700975的新的工具酶CauR，其在非模式菌株谷氨酸棒杆菌S9114中的效率相较于现有的高效重组酶recET和red系统更高。在此基础上，我们对cpf1核酸酶和CauR重组酶进行了耦合，进一步显著提升了C.glutamicum S9114的同源重组能力，为非模式菌株的基因编辑提供了一种新的选择。
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公开(公告)号：CN119736295A
公开(公告)日：2025-04-01
申请号：CN202411985305.2
申请日：2024-12-31
Applicant: 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N9/14 , C07K14/245 , C12N15/70 , C12P19/26 , C12N1/21 , C12N15/55 , C12N15/61 , C12N15/54 , C12N15/53 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种GlcNAc6P感应元器件及促进乙酰氨基葡萄糖合成的方法。现有GlcNAc6P感应元器件存在泄露严重、响应范围小的问题，这导致利用GlcNAc6P感应元器件调控磷酸酶表达的过程中，在胞内GlcNAc6P未积累时磷酸酶也具有较高的表达强度，影响了前体物质的供给。此外，随着胞内GlcNAc6P浓度的快速提高，磷酸酶的表达量上限较低，无法满足胞内去磷酸化的需求，限制了GlcNAc产量的进一步提高。因此本发明对现有的GlcNAc6P感应元器件进行优化，对nagC结合序列进行定向进化以及优化阻遏蛋白nagC表达强度，降低传感器泄露表达水平的同时扩大其响应范围，从而更有效更严谨的调控磷酸酶的表达强度以适应发酵不同时期细胞内GlcNAc6P浓度的变化，为进一步代谢工程改造重组菌生产乙酰氨基葡萄糖奠定了基础。
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公开(公告)号：CN119685181A
公开(公告)日：2025-03-25
申请号：CN202411607989.2
申请日：2024-11-12
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种利用乙醇诱导毕赤酵母表达人源α‑乳白蛋白的方法，属于基因工程技术领域。本发明构建了一株利用乙醇作为诱导剂，异源表达人源α‑乳白蛋白的重组毕赤酵母，构建过程使用了三种不同的表达载体，其中第一表达载体使用乙醇诱导型启动子表达DNA结合蛋白和转录激活因子的融合多肽，第二表达载体依次表达蛋白结合序列、甲醇诱导型启动子、α信号肽和人源α‑乳白蛋白，第三表达载体过表达参与蛋白质靶向内质网的信号识别颗粒亚基，构建得到的重组毕赤酵母摇瓶发酵人源α‑乳白蛋白产量为23.3mg/L，在3L发酵罐中产量达到1.1g/L，且发酵过程无需添加甲醇作为诱导剂，避免了甲醇可能造成的毒性和安全问题，实现了人源α‑乳白蛋白的高效生产。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN115976121B
公开(公告)日：2025-02-28
申请号：CN202310084310.5
申请日：2023-02-08
Applicant: 江苏国信协联能源有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种残糖回收的膜分离黑曲霉菌体循环连续发酵生产柠檬酸的方法。本发明所述方法为：将黑曲霉种子液接入发酵培养基，发酵培养生产柠檬酸；当柠檬酸浓度达到一定浓度后，开启循环泵，利用膜组件从发酵罐连续分离出含柠檬酸的膜分离液，同时以相同速度向发酵罐内连续流加补料基质，使发酵液体积保持平衡；从膜分离液中提取柠檬酸；向剩余提取废液中加入普鲁兰酶酶解后，再加入葡萄糖，配制成葡萄糖溶液作为补料基质，重新流加至发酵罐。本发明通过膜分离技术使发酵过程产物分离和菌体截留，实现了黑曲霉菌体循环连续发酵；利用提取废液配制补料基质重新流加至发酵罐，实现了残糖回收。
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公开(公告)号：CN117946224B
公开(公告)日：2025-02-14
申请号：CN202410156909.X
申请日：2024-02-04
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种无膜细胞器的构建及其在调控代谢合成中的应用。通过设计八肽基本元件，构建由肽段重复串联构成的重组无序蛋白，导入表达宿主中，得到生物分子凝聚体即无膜细胞器，在枯草芽孢杆菌胞内构建了具有良好流动性、稳定性与温敏性的无膜细胞器并对其进行验证，证明构建得到的重组无序蛋白具有高度的可编程性。利用可视化实验对无膜细胞器的功能进行测试，构建得到的无膜细胞器不仅可以允许小分子化合物的扩展渗透，而且可以招募特定的靶向蛋白，能够应用于调控目标化合物代谢。
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公开(公告)号：CN118878701A
公开(公告)日：2024-11-01
申请号：CN202410919458.0
申请日：2024-07-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种牛源乳铁蛋白抗菌肽改造体及其在毕赤酵母中的表达与应用，属于生物工程技术领域。本发明以牛源乳铁蛋白抗菌肽Lactoferricin为基础进行改造，改造包括将牛乳铁蛋白抗菌肽Lactoferricin与牛乳铁蛋白抗菌肽LF1‑11和Lactoferrampin融合表达，或将氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的Lactoferricin进行突变，突变位点包括第4位精氨酸、第5位精氨酸、第8位色氨酸、第9位精氨酸、第11位赖氨酸、第14位甘氨酸或其组合，并在毕赤酵母中进行重组表达，得到的抗菌肽改造体Lactoferricin‑LF1‑11‑Lactoferrampin和LFT3相较母肽Lactoferricin对金黄色葡萄球菌的抑菌活性得到了提升，有望替代抗生素成为一种安全、绿色、高效的抗菌剂，应用前景十分广阔。
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公开(公告)号：CN118440970A
公开(公告)日：2024-08-06
申请号：CN202410607555.6
申请日：2024-05-16
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌中乳糖或其类似物生物传感器筛选系统的构建及应用。本发明设计了一种基于乳糖操纵子的适用于枯草芽孢杆菌的“双筛选”生物传感器阻遏蛋白筛选基因回路：通过负筛选致死回路实现阻遏蛋白DNA结合活性筛选；通过正筛选荧光信号实现变构激活活性筛选；最终获得目标乳糖类似物识别活性的生物传感器。使用该筛选平台可获得响应乳糖、2’‑岩藻糖基乳糖、3‑岩藻糖基乳糖等物质的新型生物传感器，且经验证，本发明根据筛选结果构建的生物传感器具有较高的检测灵敏度和特异性。
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公开(公告)号：CN118440833A
公开(公告)日：2024-08-06
申请号：CN202410588945.3
申请日：2024-05-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种通过改造内质网提高卵清蛋白产量的酿酒酵母，属于基因工程技术领域。本发明在酿酒酵母CEN.PK2‑1C中异源表达卵清蛋白编码基因，并在卵清蛋白的N端上游插入INU1信号肽，以实现卵清蛋白的胞外分泌；之后使用荧光蛋白表征内质网中未折叠蛋白反应，在酿酒酵母中选用强度不同的启动子共表达分子伴侣Kar2和PDI，以促进内质网的折叠；敲除opi1基因，提高产物分泌量；过表达转录因子INO2和INO4，使内质网扩张，增加酿酒酵母的蛋白质合成能力并促进了卵清蛋白的合成。构建得到的酿酒酵母发酵生产72小时卵清蛋白的产量达到6.2mg/L。
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