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公开(公告)号：CN103160517A
公开(公告)日：2013-06-19
申请号：CN201110422761.2
申请日：2011-12-16
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中Rav1p基因的克隆与表达方法，本发明设计了一对特异性引物，引物1：5’-ACCGGAATTCATGTCATTGAACTTTCTTCCAGGACGCC-3’(EcoR I)引物2：5’-CTACGCGTCGACTACAAAGTCATCTAGTAAGTTCTTG-3’(Sal I)，构建了酿酒酵母Rav1p的克隆方法和高效表达方法。RAVE复合物是调节酿酒酵母V-ATP酶活性的蛋白复合体，而Rav1p是RAVE复合物中分子量最大的一个亚基，利用本发明人构建的重组质粒可以实现Rav1p在酿酒酵母细胞内的基因敲除，从而构建高压二氧化碳敏感型酿酒酵母菌株。在食品饮料发酵后，可用高压二氧化碳灭活此酵母菌，既达到了除菌的目的，又不会影响食品的风味。
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公开(公告)号：CN101955923B
公开(公告)日：2012-05-23
申请号：CN201010297893.2
申请日：2010-09-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明名称为一种提高过氧化氢酶存储稳定性的方法本发明以Serratia marcescens SYBC08(保藏号为CGMCC No.3449)为出发菌株，经过深层发酵、菌体破壁和离心后获得了胞内过氧化氢酶液，其酶活力不低于20000U/ml(体积等同于发酵液体积)。在该酶液中同时添加一定浓度的NaCl和CaCl2后，其使用效果明显高于单独添加NaCl、CaCl2、明胶、甘油的效果：酶液在30℃储存30d内，过氧化氢酶的活力得到提高，增强了酶的使用效果；酶液在30℃存储90d后，酶活保留率高达90％以上，显著提高了酶的稳定性。该方法解决了液态过氧化氢酶易失活的问题，属于酶制剂技术领域。
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公开(公告)号：CN104276990B
公开(公告)日：2017-08-15
申请号：CN201310286354.2
申请日：2013-07-04
Applicant: 江南大学
IPC: C07D207/16 , B01J20/28 , B01D15/08
Abstract: 本发明涉及一种利用活性炭对L‑羟脯氨酸发酵液脱色的方法，由活性炭的预处理、发酵液的预处理、L‑羟脯氨酸发酵液的连续脱色和活性炭的再生等步骤组成。本发明在层析柱内填充粉末状活性炭对L‑羟脯氨酸发酵液进行连续脱色，与用粉末状活性炭分批脱色相比，活性炭可以反复多次使用，而且不用反复装柱，脱色后可直接进行再生，降低劳动强度，减少购买活性炭的成本。另外整个过程在室温下进行，在大批量脱色时更加容易操作，避免高温危险，并节约能源和降低成本。本发明主要用于L‑羟脯氨酸发酵液中色素的去除，适合工业应用。
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公开(公告)号：CN106434735A
公开(公告)日：2017-02-22
申请号：CN201610892831.3
申请日：2016-10-12
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N15/815 , C12N9/2482 , C12N2800/22 , C12Y302/01008
Abstract: 本发明公开提供了一种提高半纤维素酶、纤维素酶或木质纤维素水解辅助酶蛋白在毕赤酵母中异源表达量的方法。本发明通过毕赤酵母密码子偏好的特性，对来源于黑曲霉Aspergillus niger的木聚糖酶(XynC)基因进行密码子优化，其优化后的核苷酸序列(AxynC)经人工合成，并构建重组毕赤酵母表达载体pPIC9K-AxynC和pPICZαA-AxynC。利用两步电击转化法，构建高产木聚糖酶的重组毕赤酵母，即将线性化的pPIC9K-AxynC转化毕赤酵母GS115，获得了一株产酶能力较强的菌株。以该高酶活菌株作为宿主菌进行第二次电击转化，将线性化的pPICZαA-AxynC电击转化该菌株，获得了一株高产木聚糖酶的双质粒重组毕赤酵母。通过检测表明，经过密码子优化的木聚糖酶基因能够在毕赤酵母中成功表达，而且利用两步电击转化法构建的高产木聚糖酶重组菌能稳定高效生产木聚糖酶，摇瓶
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公开(公告)号：CN105603017A
公开(公告)日：2016-05-25
申请号：CN201610035787.4
申请日：2016-01-19
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12P13/24 , C12N9/0071 , C12Y114/11002
Abstract: 本发明公开了一种利用重组嗜乙酸棒杆菌发酵生产反式-4-羟基-L-脯氨酸的方法。该重组嗜乙酸棒杆菌携带的重组质粒具有催化脯氨酸生成反式-4-羟脯氨酸的脯氨酸羟化酶基因(P4H)。在重组嗜乙酸棒杆菌细胞内，脯氨酸-4-羟化酶在α-酮戊二酸以及亚铁离子存在的情况下，可以将游离的L-脯氨酸转化为反式-4-羟基-L-脯氨酸。本发明还公开了所述在嗜乙酸棒杆菌反式-4-羟基-L-脯氨酸生产中的应用。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105572069A
公开(公告)日：2016-05-11
申请号：CN201610035855.7
申请日：2016-01-19
Applicant: 江南大学
IPC: G01N21/33
CPC classification number: G01N21/33
Abstract: 本发明公开一种发酵液中顺式-3-羟基L-脯氨酸的快速检测方法，旨在提供一种使用方便，快速简便，灵敏度高的顺式-3-羟基L-脯氨酸快速检测方法。该方法相比常用的高效液相色谱法和氯胺T法具有无需贵重仪器、操作简单、反应时间短、所需样品少、灵敏度较高等优点。大幅度的提高了工作效率，具有广泛的应用和推广价值。
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公开(公告)号：CN105543303A
公开(公告)日：2016-05-04
申请号：CN201610035648.1
申请日：2016-01-19
Applicant: 江南大学
IPC: C12P13/24
CPC classification number: C12P13/24
Abstract: 本发明公开了一种有效提高羟脯氨酸产量的生物合成方法。其中，生物合成法生产羟基-L-脯氨酸的系统是指，在生物细胞内生物体在α-酮戊二酸及亚铁离子存在的情况下利用脯氨酸羟化酶，将游离的L-脯氨酸转化为反式-4-羟基-L-脯氨酸的生产方法。提高羟脯氨酸产量的方法为：切断生物细胞内与L-脯氨酸竞争前体底物谷氨酸的其他代谢途径。其中，其他代谢途径是指，精氨酸代谢途径。通过使用这种方法，反式-4-羟基-L-脯氨酸的产量达到921mg/L。
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公开(公告)号：CN105420269A
公开(公告)日：2016-03-23
申请号：CN201510918697.5
申请日：2015-12-11
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种毕赤酵母中共表达血红蛋白VHb和纤维素酶蛋白的构建方法，具体涉及纤维素酶蛋白基因密码子优化及其与透明颤菌血红蛋白(VHb)共表达毕赤酵母体系的构建。本发明利用Gene Designer(DNA2.0,Menlo Park,CA,USA)软件对EG II(GenBank Accession No.DQ178347.1)核苷酸序列进行密码子偏向性优化，构建了pPIC9K-eg2表达载体，并以Pichiapastoris GS115为宿主通过电转化获得重组毕赤酵母菌株。另外，从NCBI中获得VHb(GenBank Accession No.M30794.1)核苷酸序列，通过人工合成基因后构建了pPICZαA-vgb表达载体，以含EG II基因重组毕赤酵母菌株作为宿主，通过电转化获得共表达毕赤酵母菌株。通过检测表明，共表达菌株在菌浓生长与酶活方面均有提高，其中OD600值提高7.2％，酶活提高2.2％。
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公开(公告)号：CN105385703A
公开(公告)日：2016-03-09
申请号：CN201510702317.4
申请日：2015-10-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 高产反式-4-羟脯氨酸sucA基因敲除菌的构建。本发明公开了一种利用基因敲除获得反式-4-羟基-L-脯氨酸的生物合成方法。在大肠杆菌BL21(DE3)△putA的基础上敲除基因sucA，打断TCA循环中由α-酮戊二酸生成琥珀酸(由α-酮戊二酸脱氢酶复合体催化的)的过程，同时插入反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶基因(hyp)，之后转入质粒pUC19-Ptrp2-hyp-vgb。由羟化酶取代α-酮戊二酸脱氢酶的作用，“回补”TCA循环过程，保证TCA循环进行的同时产生羟脯氨酸。本发明还公开了所述重组大肠杆菌在生产反式-4-羟脯氨酸中的应用，摇瓶发酵结果表明，培养基优化后的羟脯氨酸产量为1344.1mg/L，是优化前的5.53倍左右。与同样转入质粒pUC19-Ptrp2-hyp-vgb的原菌相比，在产羟脯氨酸方面具有优势。
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公开(公告)号：CN105018546A
公开(公告)日：2015-11-04
申请号：CN201410189593.0
申请日：2014-04-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种提取甘蔗渣纤维素的方法，其特征在于：以甘蔗渣为原料，采用循环应用甘油/水预处理的方法，蒸煮温度为200℃-240℃，蒸煮时间1小时-5小时，并运用蒸煮过程中的抽滤、洗涤的甘油可7次循环蒸煮处理甘蔗渣，而蒸发、洗涤、抽滤的水则回收用于沉淀木质素，达到了提取甘蔗渣纤维素的目的，采用美国能源实验室NREL法测定其纤维素组分，纤维素保留率为94％，木质素去除率为55％以上，酶解效率48％，实现了循环应用甘油/水预处理甘蔗汁渣废料为纤维素再利用目标，又节省了大量的甘油/水，为今后大规模乃至工业化生产起到积极的作用。
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