一种极耐热木聚糖酶及制备方法和应用

    公开(公告)号:CN106754827A

    公开(公告)日:2017-05-31

    申请号:CN201611008628.1

    申请日:2016-11-16

    摘要: 本发明公开了一种极耐热木聚糖酶及制备方法和应用,它通过自嗜热陆地热泉高温神袍菌克隆得到木聚糖酶A基因,电转化至宿主菌E.coli BL21,经诱导表达、培养及分离纯化获得,具有极强的耐热性能和中性pH条件下高活性的特性;该木聚糖酶在95℃、pH7.0的条件下酶活性最高,比酶活达到145.8U/mg;在温度为70℃‑100℃、pH为5.5‑8.5的范围内,均具有较高的酶活;耐热性能极高,在85℃、添加终浓度为5mm Ca2+的反应体系中,保温2h酶活性保持不变。本发明得到的木聚糖酶比现有木聚糖酶具有更大的优越性,适用于80℃以上高温、中性pH条件下半纤维素的降解,具有潜在的工业应用价值。

    水平酶活达到了410U/mL,发酵上清液中蛋白含一种提高木质纤维素基质水解酶产量的方 量达到了0.37mg/mL。法

    公开(公告)号:CN106434735A

    公开(公告)日:2017-02-22

    申请号:CN201610892831.3

    申请日:2016-10-12

    申请人: 江南大学

    IPC分类号: C12N15/81 C12N9/42 C12R1/84

    摘要: 本发明公开提供了一种提高半纤维素酶、纤维素酶或木质纤维素水解辅助酶蛋白在毕赤酵母中异源表达量的方法。本发明通过毕赤酵母密码子偏好的特性,对来源于黑曲霉Aspergillus niger的木聚糖酶(XynC)基因进行密码子优化,其优化后的核苷酸序列(AxynC)经人工合成,并构建重组毕赤酵母表达载体pPIC9K-AxynC和pPICZαA-AxynC。利用两步电击转化法,构建高产木聚糖酶的重组毕赤酵母,即将线性化的pPIC9K-AxynC转化毕赤酵母GS115,获得了一株产酶能力较强的菌株。以该高酶活菌株作为宿主菌进行第二次电击转化,将线性化的pPICZαA-AxynC电击转化该菌株,获得了一株高产木聚糖酶的双质粒重组毕赤酵母。通过检测表明,经过密码子优化的木聚糖酶基因能够在毕赤酵母中成功表达,而且利用两步电击转化法构建的高产木聚糖酶重组菌能稳定高效生产木聚糖酶,摇瓶

    一种木聚糖酶TlXynA的突变基因TlXynA_2及其应用

    公开(公告)号:CN105886520A

    公开(公告)日:2016-08-24

    申请号:CN201610498150.9

    申请日:2016-06-29

    申请人: 山东大学

    IPC分类号: C12N15/56 C12N9/42 C12N15/70

    CPC分类号: C12N9/2482 C12Y302/01008

    摘要: 本发明公开了一种木聚糖酶TlXynA的突变基因TlXynA_2,所述基因的突变位点为R116Q、R161Q和R187S,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还公开了所述基因在制备木聚糖酶中的应用。实验证明,这种基因所编码的突变木聚糖酶活性可达到3623IU/mg,是野生型酶的99.7%;在外加盐浓度为5M时,其相对酶活性是野生型酶的1.50倍。预示该突变木聚糖酶具有耐高温、耐盐的特性,在饲料、食品、造纸、医药、能源等工业生产中具有广阔的应用前景。

    对胰蛋白酶抗性提高的β-1,4-内切木聚糖酶及其制备方法与用途

    公开(公告)号:CN105112388A

    公开(公告)日:2015-12-02

    申请号:CN201510567342.6

    申请日:2015-09-08

    申请人: 暨南大学

    IPC分类号: C12N9/42 C12N15/56

    CPC分类号: C12N9/2482 C12Y302/01008

    摘要: 本发明公开了一种对胰蛋白酶抗性提高的β-1,4-内切木聚糖酶。该酶是由氨基酸序列为SEQ ID NO.1的β-1,4-内切木聚糖酶中制造两个氨基酸取代而产生的,对胰蛋白酶抗性更强的β-1,4-内切木聚糖酶,所述的氨基酸取代是第68位和101位的取代。本发明通过蛋白质工程技术对XynA分子的关键氨基酸残基进行了改造,提供了一种对胰蛋白酶抗性提高的XynA突变体,其对胰蛋白酶的抗性半衰期比野生型XynA延长了160分钟,其他酶学性质与野生型酶基本一致,该突变体酶可用于做饲料添加剂。