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公开(公告)号：CN112592903B
公开(公告)日：2022-03-25
申请号：CN202011622463.3
申请日：2020-12-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种突变型丙酮酸氧化酶及其在2‑丁酮酸代谢解毒中的应用，具体涉及一种利用该突变型丙酮酸氧化酶重构乙酸旁路途径增强细胞对2‑丁酮酸耐受性的方法，属于基因工程和微生物发酵技术领域。对丙酮酸氧化酶(PoxB)进行定点饱和突变得到PoxBF112W突变体，该酶增强了丙酮酸选择性，减弱了2‑丁酮酸结合亲和力。基于此突变体，在微生物细胞TWF115 ΔaceE中重建乙酸旁路，用于L‑苏氨酸的生物合成供应乙酰辅酶A和还原型辅助因子。该重构的乙酸旁路途径可以进一步去除2‑丁酮酸的代谢毒性，帮助宿主菌TWF115 ΔaceE在5g/L的2‑OBA添加下合成更高的L‑苏氨酸(13.98g/L)。
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公开(公告)号：CN113174393A
公开(公告)日：2021-07-27
申请号：CN202110468047.0
申请日：2021-04-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种改善大肠杆菌耐药性的方法及其应用，属于基因工程和发酵工程领域。本发明敲除大肠杆菌基因组上三个鞭毛基因簇flhE‑motA，fliY‑fliR和flgN‑flgL得到鞭毛精简菌株WJW010，敲除菌毛基因簇fimB‑fimH得到菌毛精简菌株WJW011。鞭毛或菌毛合成基因簇的敲除可以降低对头孢西丁的耐药性，WJW010和WJW011对头孢西丁的MIC分别是8mg/L、8mg/L，较野生对照菌W3110降低1倍；并且，敲除鞭毛基因簇或菌毛基因簇能够提升合成乙酰辅酶A和ATP水平；实验表明，WJW010和WJW011合成乙酰辅酶A和ATP水平较野生对照W3110提高。
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公开(公告)号：CN110669709B
公开(公告)日：2021-03-02
申请号：CN201910701811.7
申请日：2019-07-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种通过敲除鞭毛和菌毛基因高效合成PHB的方法，属于基因工程和发酵工程领域。本发明敲除大肠杆菌基因组上三个鞭毛基因簇flhE‑motA，fliY‑fliR和flgN‑flgL得到鞭毛精简菌株WJW010，敲除菌毛基因簇fimB‑fimH得到菌毛精简菌株WJW011。随后将PHB合成的三个基因转化到菌株WJW010和WJW011中，得到重组菌WJW010/pBHR68和WJW011/pBHR68，在正常的发酵条件下即可以合成细胞干重19.2％、2.8％的PHB，PHB体积产量是野生对照菌W3110/pBHR68(2％)的9.6倍和1.4倍。
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公开(公告)号：CN110373435B
公开(公告)日：2021-02-26
申请号：CN201910701822.5
申请日：2019-07-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种通过敲除rfaD基因高效合成PHB的方法，属于基因工程和发酵工程领域。本发明敲除大肠杆菌基因组上rfaD基因后将合成PHB的酶的编码基因转化到菌株中发酵生产PHB。发现rfaD基因的敲除可以显著改善大肠杆菌W3110、DH5α和JM109合成PHB的能力，WJW00/pDXW‑8‑phaCAB的PHB体积产量较对照菌W3110/pDXW‑8‑phaCAB提高3.95和3.66倍；WJD00/pDXW‑8‑phaCAB细胞合成PHB占细胞干重比例较对照菌提高约80％，转化率提高约1.9倍；WJJ00/pDXW‑8‑phaCAB细胞合成PHB占细胞干重比例较对照菌提高约75％，转化率提高约1.8倍。
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公开(公告)号：CN110373372A
公开(公告)日：2019-10-25
申请号：CN201910703169.6
申请日：2019-07-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种通过敲除LPS合成基因簇高效合成PHB的方法，属于基因工程和发酵工程领域。本发明在大肠杆菌中敲除敲除大肠杆菌基因组上核心糖基因簇的14个基因得到突变菌WJW01，继续敲除大肠杆菌基因组上O-抗原基因簇的11个基因得到突变菌WJW02，随后将PHB合成的三个基因分别转化到精简菌株WJW01和WJW02中，得到的重组菌WJW01/pBHR68和WJW02/pBHR68分别可以合成PHB高达细胞干重的80.6％和82.0％，是野生型对照菌W3110/pBHR68(1.5％)的53.7和54.7倍。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105950517B
公开(公告)日：2019-05-17
申请号：CN201610515320.X
申请日：2016-06-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸棒杆菌及其应用，属于微生物领域。所述谷氨酸棒杆菌于2016年6月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2016303。该谷氨酸棒杆菌可在细胞内积累较多的丙酰辅酶A，较ATCC13869提高了15.8倍，可用于以丙酰辅酶A为底物的相关代谢产物的生产。当引入聚羟基脂肪酸酯合成基因后，该谷氨酸棒杆菌可以合成PHBV，但在ATCC13869中合成产物为PHB。该发明解决了外源添加丙酸盐或丙酸来生产PHBV的现状，实现了在谷氨酸棒杆菌中无外源添加丙酸或丙酸盐直接生产PHBV，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN103820377A
公开(公告)日：2014-05-28
申请号：CN201410052649.8
申请日：2014-02-17
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产Kdo2-lipidA的基因工程菌及其构建方法和应用，属于遗传工程领域。所述基因工程菌为WJW00，所述基因工程菌为无抗性E.coliW3110△rfaD，其中rfaD发生缺失突变失活。本发明构建的菌株Kdo2-lipidA结构正确，生长状况良好，没有引入任何外源抗性基因序列，更有利于大规模工业化生产。
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公开(公告)号：CN114480464B
公开(公告)日：2023-10-03
申请号：CN202210235334.1
申请日：2022-03-11
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/74 , C12N15/64 , C12N9/22 , C12N15/113 , C12R1/63
Abstract: 本发明公开了一种副溶血弧菌CRISPRi的双质粒构建方法，属于分子生物学和生物技术领域。本发明公开了CRISPRi工具质粒包括pSg132与pBAD33T‑d9质粒的构建方法。本发明提供了一种副溶血弧菌CRISPRi的2种质粒构建方法，经过重叠PCR与一步克隆方法构建CRISPRi工具质粒。同时也提供了双质粒在副溶血弧菌基因功能研究中的应用，可更快捷地研究基因尤其是关键基因的功能，或同时干扰多个基因对副溶血弧菌的影响。为副溶血弧菌基因功能研究提供了新的方法和技术，推动副溶血弧菌功能基因的研究发展。
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公开(公告)号：CN113106051B
公开(公告)日：2023-10-03
申请号：CN202110469213.9
申请日：2021-04-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了缺失组合物基因簇在降低大肠杆菌对抗生素的耐药性中的应用，属于基因工程和生物医药领域。本发明敲除大肠杆菌W3110的核心糖基因簇gmhD‑waaQ，O‑抗原基因簇wbbL‑rmlB，胞外多糖基因簇galF‑wza，4型荚膜多糖合成基因簇yccC‑ymcD，三个鞭毛基因簇flhE‑motA、fliY‑fliR、flgN‑flgL，最终得到菌株WJW07，该菌株在LB培养基中对克林霉素和新生霉素的MIC分别为20mg/L和3mg/L，较野生对照菌W3110降低65倍和250倍，并且对一系列膜壁结构相关合成和转运基因簇的删除，使得重组菌株WJW07的生物量增加，有利于工业生产应用。
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公开(公告)号：CN114606254B
公开(公告)日：2023-08-25
申请号：CN202210235371.2
申请日：2022-03-11
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种副溶血弧菌基因高效敲除质粒的构建方法，属于分子生物学和生物技术领域。本发明优化了敲除过程，引入Cre/loxP系统。在敲除同源臂之间加入了带有loxP位点的庆大霉素抗性片段，后该抗性片段通过Cre酶去除。第二次同源重组时加入庆大霉素，只有正确进行同源重组的菌株可以存活于10％蔗糖庆大抗性平板上，以此提高敲除菌株的筛选效率。再进行第二次结合转导，将带有cre基因的pOTC质粒导入副溶血弧菌。cre基因在细胞中表达Cre酶，识别loxP位点，并去除loxL与loxR之间的基因片段，即去除庆大抗性片段，在含有10％蔗糖的试管中去除pOTC质粒，本发明的方法提高正确菌株的筛选效率。
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