公开(公告)号：CN103805600A

公开(公告)日：2014-05-21

申请号：CN201410080024.2

申请日：2014-03-06

Applicant: 福州大学

Inventor： 林峻

IPC: C12N15/11 ,  C12N15/63

Abstract: 本发明提供一种DNA分子克隆方法，制备在上、下游均具有5’单链末端的载体和目的基因；载体和目的基因的单链末端能互补配对，无需连接酶，即将载体和目的基因连接重组成闭合环状DNA，然后直接转化感受态细胞，在细胞内扩增重组DNA。依赖连接酶的克隆方法简单高效，是克隆单个基因的常用方法，但该技术也存在明显的不足，而本发明提供的方法不受序列限制、简便高速，而且重组准确。

公开(公告)号：CN114875046A

公开(公告)日：2022-08-09

申请号：CN202210598346.0

申请日：2022-05-30

Applicant: 福州大学

Inventor： 林峻 ,  燕天鹤

IPC: C12N15/31 ,  C12N15/55 ,  C12N15/80 ,  C12N15/66 ,  C12N15/64

Abstract: 本发明公开了一种丝状真菌复制子，所述复制子的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。所述复制子是以19种真菌基因组为模板构建宏基因组文库，转化黑曲霉孢子筛选得到，来自厚孢根霉内生菌伯克霍尔德氏菌HKI454基因组。本发明的复制子可以在黑曲霉表达系统中发挥复制功能，并且可以提供比AMA1复制子更高的稳定性，为首次在除构巢曲霉以外的真菌中发现的复制子，丰富了复制子元件库，拓展了丝状真菌利用复制子的选择多样性。

公开(公告)号：CN107217065A

公开(公告)日：2017-09-29

申请号：CN201710626659.1

申请日：2017-07-28

Applicant: 福州大学

Inventor： 林峻

IPC: C12N15/56 ,  C12N9/42

Abstract: 本发明公开了一种内切葡聚糖酶基因及其编码蛋白，所述内切葡聚糖酶基因的核酸序列如SEQ ID NO.1所示，该内切葡聚糖酶基因的编码蛋白具有如SEQ ID NO.2所示的蛋白序列。本发明内切葡聚糖酶基因编码的内切葡聚糖酶兼具良好的耐热性和抗冻融性，能够广泛应用于化妆品、食品、医药学、环境保护等领域。

公开(公告)号：CN107217064A

公开(公告)日：2017-09-29

申请号：CN201710626682.0

申请日：2017-07-28

Applicant: 福州大学

Inventor： 林峻

IPC: C12N15/53 ,  C12N9/02

Abstract: 本发明公开了一种超氧化物歧化酶基因及其编码蛋白，所述超氧化物歧化酶基因的DNA序列如SEQ ID NO.1所示，该超氧化物歧化酶基因的编码蛋白具有如SEQ ID NO.2所示的蛋白序列。本发明SOD基因编码的超氧化物歧化酶兼具良好的耐热性和抗冻融性，能够广泛应用于化妆品、食品、医药学、环境保护等领域。

公开(公告)号：CN106244618A

公开(公告)日：2016-12-21

申请号：CN201610812891.X

申请日：2016-09-09

Applicant: 福州大学

Inventor： 林峻

IPC: C12N15/80 ,  C12R1/845

CPC classification number: C12N15/80 ,  C12N2800/10

Abstract: 本发明公开了一种转化外源脱氧核糖核酸进入葡枝根霉休眠孢子的方法，包括葡枝根霉培养和孢子收集、葡枝根霉孢子预处理以及使用HDEN法电击葡枝根霉孢子三个步骤，得到导入待转化质粒的葡枝根霉孢子。本发明用未萌发的孢子来作为导入外源分子的起始材料，并且应用HDEN电转化技术将外源DNA导入葡枝根霉休眠孢子，可以省去做孢子萌发这一复杂的步骤，省去传统方法中制备原生质体或农杆菌转化的步骤等，并且转化率高，每个转化反应体系，至少可以达到不少于6000个阳性转化子的效果。

公开(公告)号：CN106244616A

公开(公告)日：2016-12-21

申请号：CN201610812859.1

申请日：2016-09-09

Applicant: 福州大学

Inventor： 林峻

IPC: C12N15/80 ,  C12R1/80

CPC classification number: C12N15/80 ,  C12N2800/10

Abstract: 本发明公开了一种使外源DNA穿透细胞屏障进入点青霉休眠孢子的方法，包括点青霉培养和孢子收集、点青霉孢子预处理以及使用HDEN法电击点青霉孢子三个步骤，得到导入待转化质粒的点青霉孢子。本发明用未萌发的孢子来作为导入外源分子的起始材料，并且应用HDEN电转化技术将外源DNA导入点青霉休眠孢子，可以省去做孢子萌发这一复杂的步骤，省去传统方法中制备原生质体或农杆菌转化的步骤等，并且转化率高，每个转化反应体系，至少可以达到不少于6000个阳性转化子的效果。

公开(公告)号：CN106191122A

公开(公告)日：2016-12-07

申请号：CN201610813626.3

申请日：2016-09-09

Applicant: 福州大学

Inventor： 林峻

IPC: C12N15/87 ,  C12R1/77

CPC classification number: C12N15/87

Abstract: 本发明公开了一种在串珠镰刀菌休眠孢子中表达蛋白质的方法，包括串珠镰刀菌培养和孢子收集、串珠镰刀菌孢子预处理以及使用HDEN法电击串珠镰刀菌孢子三个步骤，该方法绕过真菌孢子萌发这个步骤，采用HDEN电转化技术，将体外的单链编码蛋白RNA递送穿过细胞壁和细胞膜，在串珠镰刀菌休眠孢子内表达蛋白质。本发明方法步骤简便快速，效果极佳，转化率达到90%以上。

公开(公告)号：CN106191098A

公开(公告)日：2016-12-07

申请号：CN201610812876.5

申请日：2016-09-09

Applicant: 福州大学

Inventor： 林峻

IPC: C12N15/80 ,  C12R1/645

CPC classification number: C12N15/80

Abstract: 本发明公开了一种让外源DNA穿越卷枝毛霉未萌发孢子细胞壁和细胞膜的方法，包括卷枝毛霉培养和孢子收集、卷枝毛霉孢子预处理以及使用HDEN法电击卷枝毛霉孢子三个步骤，得到导入待转化质粒的卷枝毛霉孢子。本发明用未萌发的孢子来作为导入外源分子的起始材料，并且应用HDEN电转化技术将外源DNA导入卷枝毛霉休眠孢子，可以省去做孢子萌发这一复杂的步骤，省去传统方法中制备原生质体或农杆菌转化的步骤等，并且转化率高，每个转化反应体系，至少可以达到不少于6000个阳性转化子的效果。

公开(公告)号：CN106148387A

公开(公告)日：2016-11-23

申请号：CN201610812878.4

申请日：2016-09-09

Applicant: 福州大学

Inventor： 林峻

IPC: C12N15/80

CPC classification number: C12N15/80 ,  C12N2800/10

Abstract: 本发明公开了直接对扩展青霉休眠孢子转化外源脱氧核糖核酸的方法，包括扩展青霉培养和孢子收集、扩展青霉孢子预处理以及使用HDEN法电击扩展青霉孢子三个步骤，得到导入待转化质粒的扩展青霉孢子。本发明用未萌发的孢子来作为导入外源分子的起始材料，并且应用HDEN电转化技术将外源DNA导入扩展青霉休眠孢子，可以省去做孢子萌发这一复杂的步骤，省去传统方法中制备原生质体或农杆菌转化的步骤等，并且转化率高，每个转化反应体系，至少可以达到不少于6000个阳性转化子的效果。

公开(公告)号：CN115125224B

公开(公告)日：2023-07-18

申请号：CN202210959921.5

申请日：2022-08-11

Applicant: 福州大学

Inventor： 陈鲤群 ,  高上 ,  袁智涛 ,  王涛 ,  姜文倩 ,  林峻

IPC: C12N9/12 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种可规模化生产具有活性的DNA聚合酶的方法。所述方法包括以下步骤：1）将携带有目的基因的菌种划线于带氨苄抗性的LB平板上，挑取单菌落培养后作为种子液；2）配置高密度发酵培养基，加入发酵罐中；3）将种子液转接到步骤2)的发酵罐中进行培养；4）当培养至溶氧下降至30%以下时，开始加入补料培养基，控制溶氧为30％以上；5）当培养至细菌菌体湿重距最大菌体湿重4g/L时，一次性加入IPTG诱导，使IPTG终浓度为1±0.1 mM；6）达到最佳诱导时长后停止发酵，放罐，获取菌体。本发明提高了目标产物的发酵稳定性，并且减少了包涵体的产生，可实现规模化生产DNA聚合酶。