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公开(公告)号：CN103509099A
公开(公告)日：2014-01-15
申请号：CN201310347678.2
申请日：2013-08-12
申请人： 中国水产科学研究院黄海水产研究所
CPC分类号： C07K14/461 , A23K20/147 , A23K50/80
摘要： 本发明涉及一种半滑舌鳎雌性特异蛋白CSW2，其氨基酸序列为SEQ ID NO:2；编码上述的雌性特异蛋白CSW2的核苷酸序列为SEQ ID NO:1。本发明的CSW2基因的体外重组蛋白能够明显升高半滑舌鳎鱼苗雌性相关基因foxl2和P450芳香化酶的表达水平，具有刺激雌性相关基因表达的生物活性；同时具有降低雄性相关基因SOX9表达水平的生物活性。将CSW2重组表达产物作为饲料添加剂使用后将具有刺激雌性性腺发育的作用，具有提高雌鱼比例的效果。因此，本发明筛选的CSW2基因在半滑舌鳎性别控制和提高雌性鱼苗比例方面具有应用潜力。
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公开(公告)号：CN102119674B
公开(公告)日：2012-05-23
申请号：CN201010586350.2
申请日：2010-11-30
申请人： 中国水产科学研究院黄海水产研究所
IPC分类号： A01K61/00
CPC分类号： Y02A40/81
摘要： 一种半滑舌鳎三倍体鱼苗批量化诱导方法，包括三倍体鱼苗的诱导方法和鉴定方法；诱导方法包括未受精卵的采集及授精；三倍体诱导起始时间的确定、静水压休克压力和处理时间的确定；鉴定方法包括倍性测定仪鉴定和染色体分析鉴定。该方法首次建立了采用静水压诱导批量化生产半滑舌鳎三倍体鱼苗的方法，筛选到三倍体诱导的适宜起始时间和静水压休克条件，建立了三倍体鱼苗批量化诱导的方法。本发明方法获得的三倍体鱼苗诱导率高达95％以上。
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公开(公告)号：CN101699998B
公开(公告)日：2011-10-12
申请号：CN200910230012.2
申请日：2009-11-03
申请人： 中国水产科学研究院黄海水产研究所
IPC分类号： A01K61/00
CPC分类号： Y02A40/81
摘要： 一种生长快成活率高牙鲆优良品系的选育方法，其技术方法包括：牙鲆育种群体的培育和生殖调控，精子冷冻技术辅助家系建立，家系的培育和标准化，数量性状的测定和分析，遗传参数估计，优良家系筛选和利用异源冷冻精子诱导牙鲆雌核发育构建优良品系。本发明可选择培育出生长速度快、成活率高牙鲆养殖新品系，筛选出生长快、成活率高的优良牙鲆家系共4个(0703、0719、0750和0751)，利用冷冻保存的鲈鱼精子，诱导建立了雌核发育的牙鲆优良品系7个(0920、0921、0927、0938、0939、0946和0947)。该技术方法可用于牙鲆养殖新品种培育，解决海水养殖鱼类牙鲆生长慢、成活率低的问题，可提高牙鲆养殖经济效益。
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公开(公告)号：CN101911918B
公开(公告)日：2011-06-15
申请号：CN201010128852.0
申请日：2010-03-18
申请人： 中国水产科学研究院黄海水产研究所
IPC分类号： A01K61/00 , C12N5/076 , C12N5/0735
CPC分类号： Y02A40/81
摘要： 本发明涉及一种牙鲆抗病优良品系选育方法，包括牙鲆群体选育；牙鲆家系选育；其特征在于还包括牙鲆抗病家系的分子标记辅助选育；或包括牙鲆抗病家系的人工雌核发育选育；或包括牙鲆抗病家系的近交选育。本发明综合采用群体选育、种内杂交、家系选育、分子标记辅助选育、人工雌核发育和近交等多种生物技术，以牙鲆为材料首次建立了我国海水鱼类抗病优良品系选育方法，培育出抗鰻弧菌病力明显提高的牙鲆优良品系，养殖存活率提高20-47％，生长率提高20％以上。本发明为鱼类抗病品种选育开辟了新的技术途径，适宜在所有养殖鱼类上进行推广应用，对养殖鱼类抗病良种培育具有重要意义和应用价值，将产生巨大的经济和社会效益。
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公开(公告)号：CN101884311A
公开(公告)日：2010-11-17
申请号：CN201010221790.8
申请日：2010-06-30
申请人： 中国水产科学研究院黄海水产研究所
IPC分类号： A01K61/00
CPC分类号： Y02A40/81
摘要： 一种半滑舌鳎家系构建及优良家系选育方法，它的技术内容包括半滑舌鳎群体选育，半滑舌鳎家系构建，半滑舌鳎抗病家系及生长快速家系的筛选，本发明采用群体选育和种内杂交技术建立家系，然后采用人工感染途径从大量的家系中筛选出抗鳗弧菌病的家系，通过生长比较筛选出生长快的家系，这些优良家系鱼苗可直接进行推广应用，或用于半滑舌鳎高产抗病优良品种的培育。本发明具有针对性强、选育效率高、操作简单、效果明显等特点，建立的半滑舌鳎优良家系筛选方法为半滑舌鳎高产抗病优良品种培育开辟了新的技术途径，适宜在其它养殖鱼类上进行推广应用，对养殖鱼类高产抗病良种培育具有重要意义和应用价值。
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公开(公告)号：CN101591638A
公开(公告)日：2009-12-02
申请号：CN200910016926.9
申请日：2009-06-23
申请人： 中国水产科学研究院黄海水产研究所
IPC分类号： C12N5/06
摘要： 大菱鲆肾细胞系的构建方法，首先配制细胞培养液，以大菱鲆的肾脏组织为材料，漂洗剪碎后，用0.5％胰蛋白酶室温消化30分钟，采用200目尼龙纱网过滤收集细胞，将细胞以5－10×105个/瓶的量分装至25cm2培养瓶中，置于24℃培养。以后每隔4天半量更换细胞培养液，待原代细胞生长为单层时，用0.25％的胰蛋白酶消化细胞进行传代；8－10天传代1次，传至第8代时，细胞培养液中血清含量由20％减为10％，此时细胞系建立成功。利用这种方法获得的大菱鲆肾细胞系形态为成纤维样，可以连续传代40代以上，细胞系可以直接应用于病原特性研究、疫苗研制及功能基因研究；该构建方法适用于其他鱼类构建肾细胞系。
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公开(公告)号：CN100539832C
公开(公告)日：2009-09-16
申请号：CN200710016988.0
申请日：2007-08-28
申请人： 中国水产科学研究院黄海水产研究所
CPC分类号： Y02A40/81
摘要： 一种鱼类异源冷冻精子诱导雌核发育的方法，包括异源鱼类精子的冷冻保存和遗传失活和雌核发育二倍体鱼苗的诱导方法。本发明首次建立了采用花鲈冷冻精子诱导多种海水鱼类卵子雌核发育的方法，筛选到分别适合条斑星鲽、大菱鲆和犬齿牙鲆鱼卵的冷休克起始时间、冷休克温度和冷休克持续时间，建立了雌核发育二倍体鱼苗的诱导方法。采用本发明方法获得条斑星鲽、大菱鲆和犬齿牙鲆雌核发育鱼苗的百分率分别为7.8-40.7%，26-34%和10-25%。本发明建立的方法具有先进、高效、准确、可靠的特点，在鱼类性别控制和全雌苗种生产中具有重要应用价值，在鱼类养殖和育种上具有广阔的推广应用前景。
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公开(公告)号：CN100435630C
公开(公告)日：2008-11-26
申请号：CN200710013289.0
申请日：2007-01-27
申请人： 中国水产科学研究院黄海水产研究所
IPC分类号： A01K61/00 , A01K67/027 , A61D19/00 , A61K35/52
CPC分类号： Y02A40/81
摘要： 一种鲈鱼冷冻精子诱导半滑舌鳎卵减数雌核发育方法，是培育全雌性、生长快速的半滑舌鳎养殖新品种的育种技术，该技术属于海洋生物技术领域。技术方法主要包括：利用在液氮中冷冻保存的鲈鱼精子来诱导半滑舌鳎卵的雌核发育，冷冻精子在37℃水浴中解冻后，取100μL精液用MPRS稀释10倍，置于在6℃预冷的培养皿中，利用1000μj/cm2紫外线照射0.2min使精子遗传物质失活，然后用灭活的鲈鱼精子与半滑舌鳎卵诱导受精，受精后5min利用2℃水浴对受精卵进行休克，休克时间为20min，休克后胚胎在23℃海水浴中复温并培养，可以达到半滑舌鳎卵雌核发育。该项目技术可用于解决优良海水养殖鱼种半滑舌鳎雄性生长慢、养殖成本高的问题，可提高半滑舌鳎生长速度和养殖经济效益。
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公开(公告)号：CN101270389A
公开(公告)日：2008-09-24
申请号：CN200810015987.9
申请日：2008-05-09
申请人： 中国水产科学研究院黄海水产研究所
摘要： 一种半滑舌鳎雌性特异分子标记及其应用，包括筛选方法，含半滑舌鳎基因组DNA的提取，基因组DNA的AFLP分析和雌性特异分子标记的筛选；还包括半滑舌鳎雌性特异分子标记的克隆与序列，含雌性特异分子标记的回收，雌性特异分子标记的克隆和雌性特异分子标记的序列；再包括一种雌性特异分子标记的应用，应用于无损伤鉴别半滑舌鳎的遗传性别，即采集待测半滑舌鳎鱼基因组DNA，根据获得的3个半滑舌鳎雌性特异分子标记的序列，分别设计3对特异引物，采用其中任意1对雌性特异引物进行PCR扩增，就可以对半滑舌鳎鱼进行遗传性别鉴定。具有先进、高效、准确、可靠的特点，在半滑舌鳎单性苗种生产中具有重要应用价值，并在其它鱼类遗传性别鉴定和性别控制研究中也具有广阔应用前景。
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公开(公告)号：CN101120660A
公开(公告)日：2008-02-13
申请号：CN200710016988.0
申请日：2007-08-28
申请人： 中国水产科学研究院黄海水产研究所
CPC分类号： Y02A40/81
摘要： 一种鱼类异源冷冻精子诱导雌核发育的方法，包括异源鱼类精子的冷冻保存和遗传失活、雌核发育二倍体鱼苗的诱导和雌核发育鱼苗的鉴定方法。本发明首次建立了采用花鲈冷冻精子诱导多种海水鱼类卵子雌核发育的方法，筛选到分别适合条斑星鲽、大菱鲆和犬齿牙鲆鱼卵的冷休克起始时间、冷休克温度和冷休克持续时间，建立了雌核发育鱼苗的微卫星标记鉴定方法。采用本发明方法获得条斑星鲽、大菱鲆和犬齿牙鲆雌核发育鱼苗的百分率分别为7.8－40.7％，26－34％和10－25％。本发明建立的方法具有先进、高效、准确、可靠的特点，在鱼类性别控制和全雌苗种生产中具有重要应用价值，在鱼类养殖和育种上具有广阔的推广应用前景。
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