高产尿苷的基因工程菌及其构建方法与应用

    公开(公告)号:CN108130306A

    公开(公告)日:2018-06-08

    申请号:CN201810020944.3

    申请日:2018-01-10

    摘要: 本发明提供一种高产尿苷的基因工程菌及其构建方法与应用,该菌是在大肠杆菌的基因组上整合了核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的嘧啶核苷操纵子pyrBCAKDFE,并由强启动子Ptrc启动,重构了尿苷合成途径;在基因组上对其自身的PRPP合成酶编码基因prsA进行双拷贝,由强启动子Ptrc启动;同时缺失尿苷激酶(udk)、尿苷磷酸化酶(udp)和核苷水解酶(rihA、rihB和rihC)活性;缺失高丝氨酸脱氢酶1(thrA)活性;缺失鸟氨酸氨甲酰转移酶(argF)活性。该基因工程菌应用于发酵生产尿苷,在5L发酵罐发酵40-70h可生产尿苷40-67g/L,最大生产强度可达1.5g/(L×h),糖苷转化率为15-25%,是目前报道的发酵法生产尿苷的最高水平。

    一种羟脯氨酸的提取工艺
    24.
    发明公开

    公开(公告)号:CN106977442A

    公开(公告)日:2017-07-25

    申请号:CN201710290318.1

    申请日:2017-04-28

    IPC分类号: C07D207/16

    摘要: 本发明提供了一种羟脯氨酸的提取工艺,通过将羟脯氨酸发酵液过陶瓷膜除去菌体,然后将滤液pH调至6.5以下,过阴离子交换树脂,流出液的pH调至6.5以上,过阳离子交换树脂,将流出液减压蒸发至干燥后,用无水乙醇洗出,超声波振荡30min,最后再通过真空抽滤得到羟脯氨酸晶体;所述方法不需要经过超滤和活性炭脱色,可显著降低废污处理难度,同时旋转蒸发至干燥,减少了母液中羟脯氨酸的残留量,使得产品收率高、纯度高、质量稳定。

    一种从酶转化液中分离提取2‑酮丁酸的方法

    公开(公告)号:CN105461544B

    公开(公告)日:2017-07-11

    申请号:CN201610056886.0

    申请日:2016-01-28

    摘要: 一种从酶转化液中分离提取2‑酮丁酸的方法。采用酶催化法生产2‑酮丁酸时,酶催化液中除了含有2‑酮丁酸,还含有菌体、水溶性蛋白、色素、苏氨酸、钠盐等杂质,由于2‑酮丁酸具有在水相和有机相中易容、沸点低等特点,故分离提取困难。本方法首先通过双膜即微滤膜、超滤膜分离系统错流过滤去除发酵液中的菌体、大部分蛋白和色素,膜过滤液依次通过粉末活性炭脱色、加碱除蛋白、减压浓缩、阳离子交换柱除杂质、冷冻真空干燥操作步骤,得到纯度95.0%以上的2‑酮丁酸结晶,收率达到80%以上。本发明采用微滤和超滤双膜过滤菌体蛋白,菌体去除彻底,过滤液澄清透明;采用阳离子交换工艺除杂质,高效去除难分离的苏氨酸、钠盐等杂质。

    一种双膜连续结晶法分离提取发酵液中分支链氨基酸的方法

    公开(公告)号:CN105294468B

    公开(公告)日:2017-07-11

    申请号:CN201510880406.8

    申请日:2015-12-02

    摘要: 一种双膜连续结晶法分离提取发酵液中分支链氨基酸的方法,该方法首先通过双膜即微滤膜、纳滤膜分离系统错流过滤去除发酵液中的菌体、大部分蛋白和色素,然后通过溶胶脱蛋白、活性炭脱色、真空浓缩结晶、碱溶、脱蛋白脱色、低温等电连续结晶等操作步骤,得到纯度98.5%以上的分支链氨基酸结晶,收率达到80%以上。本发明采用微滤膜过滤菌体,改变了常规发酵液处理采用的离心、压滤机压滤等方法,菌体去除彻底,过滤液澄清透明;采用溶胶进一步去除发酵液中可溶性蛋白,采用低温等电连续结晶节省了蒸汽用量,提高产品品质。该技术去除了传统的离子交换工艺,避免产生大量高氨氮废水,实现了分支链氨基酸清洁生产。

    一种L‑色氨酸的发酵工艺
    27.
    发明公开

    公开(公告)号:CN106086101A

    公开(公告)日:2016-11-09

    申请号:CN201610712487.5

    申请日:2016-08-24

    IPC分类号: C12P13/22

    CPC分类号: C12P13/227

    摘要: 本发明提供了一种L‑色氨酸的发酵工艺,在L‑色氨酸发酵培养基中添加2g/L的棉籽饼粉进行发酵;发酵过程在乙酸产量大于5g/L时进行循环过滤,分离后的发酵清液进入提取工序;提取后的浓缩菌液进入发酵罐后补加透析培养基后继续发酵即得;所述发酵工艺发酵L‑色氨酸产酸周期延长20h,乙酸浓度维持在5g/L以下,单罐产量提高89%以上,转化率由17.0%提高至18.5%以上;由于发酵培养基中添加棉籽饼粉,未被菌体利用的棉籽壳粉在过滤中起到助滤作用,发酵液过滤速率由85mL/min提升至183mL/L。

    一种从发酵液中分离提取四氢嘧啶的方法

    公开(公告)号:CN105669560A

    公开(公告)日:2016-06-15

    申请号:CN201610017537.8

    申请日:2016-01-12

    IPC分类号: C07D239/06

    CPC分类号: C07D239/06

    摘要: 本发明提供一种从发酵液中分离提取四氢嘧啶的方法,克服现有生产工艺中存在的工艺路线复杂,分离纯化困难,能耗水耗较多等问题。本发明从富含四氢嘧啶的发酵液中分离提取四氢嘧啶,首先利用双膜系统即微滤膜、超滤膜分离系统过滤去除发酵液中的菌体、大部分蛋白和部分色素,然后利用阳离子交换树脂吸附四氢嘧啶,再用氨水将四氢嘧啶洗脱后,经过活性炭脱色、浓缩醇沉、重结晶、干燥成品等操作步骤得到四氢嘧啶晶体。

    一种从发酵液中分离提取4-羟基异亮氨酸的方法

    公开(公告)号:CN105566136A

    公开(公告)日:2016-05-11

    申请号:CN201610033463.7

    申请日:2016-01-19

    IPC分类号: C07C227/40 C07C229/22

    CPC分类号: C07C227/40 C07C229/22

    摘要: 一种从发酵液中分离提取4-羟基异亮氨酸的方法,该方法首先通过双膜即微滤膜、超滤膜分离系统错流过滤去除发酵液中的菌体、大部分蛋白和色素,然后通过阳离子交换柱除去酮戊二酸等杂酸、粉末活性炭脱色、真空浓缩、冷冻结晶、离心收集产品、干燥成品操作步骤,得到纯度97.0%以上的4-羟基异亮氨酸结晶,收率达到65%以上。本发明采用微滤和超滤双膜过滤菌体蛋白,菌体蛋白去除彻底,过滤液澄清透明;采用阳离子离子交换工艺,高效去除难分离的酮戊二酸等杂质。

    一种L-缬氨酸生产菌株及其构建方法与应用

    公开(公告)号:CN117844728B

    公开(公告)日:2024-06-04

    申请号:CN202410239011.9

    申请日:2024-03-04

    摘要: 本发明提供了一种L‑缬氨酸生产菌株及其构建方法与应用,通过构建辅酶平衡系统将L‑缬氨酸合成与磷酸戊糖途径和TCA循环剥离开来,利用辅酶平衡以消除对除糖酵解和L‑缬氨酸合成途径之外的代谢途径的依赖,且采用静态和动态代谢工程调控策略弱化回补途径和TCA循环,同时敲除了有机酸合成途径的关键基因,所构建菌株可以在好氧条件下高效率合成L‑缬氨酸,发酵周期短,转化率高;不携带质粒,发酵过程无需控制微氧或厌氧,从而不产生有机酸等副产物,满足高纯度L‑缬氨酸的生产要求,在氨基酸生产领域具有较为广泛的应用前景。