一种番鸭细小病毒VP3基因重组鸡痘病毒转移载体及其构建方法

    公开(公告)号:CN105132462B

    公开(公告)日:2019-03-26

    申请号:CN201510570155.3

    申请日:2015-09-09

    IPC分类号: C12N15/863

    摘要: 本发明公开了一种番鸭细小病毒VP3基因重组鸡痘病毒转移载体及其构建方法。以鸡痘病毒基因组为模板扩增TK基因的同源重组臂TKL、TKR,并将其连接成带有多克隆位点MCS的TK片段,再连入骨架质粒,得质粒pTK;合成反向串联表达盒S,并将其插入质粒pTK中,得质粒pTKS;在早期启动子P7.5后的MCS1处插入VP3基因,晚期启动子P11后的MCS2处插入EGFP BGH pA,即得目的转移载体pTKS‑VP3‑EGFP。将pTKS‑VP3‑EGFP转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞后,经RT‑PCR和荧光蛋白检测VP3能够正常表达。本发明为进一步研制安全、高效的MDPV重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础。