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公开(公告)号：CN112707955A
公开(公告)日：2021-04-27
申请号：CN202011521098.7
申请日：2020-12-21
Applicant: 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种提高N‑乙酰氨基葡萄糖产量的RamAM转录因子突变体，本发明提供了一种提高N‑乙酰氨基葡萄糖产量的RamAM转录因子突变体，并提供了过表达RamAM转录因子突变体的基因工程菌株，提高了N‑乙酰氨基葡萄糖在胞外的积累量，其浓度最高可达37.9g/L，为进一步代谢工程改造谷氨酸棒杆菌生产氨基葡萄糖奠定了基础。本发明提供的重组谷氨酸棒杆菌构建方法简单，便于使用，具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN109777761B
公开(公告)日：2020-10-09
申请号：CN201910193636.5
申请日：2019-03-14
Applicant: 江南大学 , 山东润德生物科技有限公司
IPC: C12N1/21 , C12N9/80 , C12P19/26 , A61K35/742 , A23L33/135 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种分泌表达几丁二糖脱乙酰酶的工程菌的构建及其应用，属于发酵工程技术领域。本发明首先构建了一株异源分泌表达几丁二糖脱乙酰酶基因的重组枯草芽孢杆菌，首次在重组载体中加入信号肽片段yncM，该信号肽可以将目的蛋白几丁二糖脱乙酰酶分泌到重组枯草芽孢杆菌的细胞外，并获得了5’端的非翻译区的突变体，显著提高了目标蛋白的表达量，极大简化了后续酶分离纯化的步骤。获得的几丁二糖脱乙酰酶，以发酵培养基发酵培养50‑60h时酶活达到最高为1548.7U/mL，几丁二糖脱乙酰酶产量最高约为620mg/L。同时，该方法具有低生产成本、生产条件温和、纯化工艺步骤简单、生产操作安全等优点。
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公开(公告)号：CN110964685A
公开(公告)日：2020-04-07
申请号：CN201911358383.9
申请日：2019-12-25
Applicant: 江南大学 , 山东润德生物科技有限公司
Abstract: 本发明涉及一种生产N-乙酰氨基葡萄糖的重组谷氨酸棒杆菌及其应用，属于代谢工程领域。该重组谷氨酸棒杆菌通过在谷氨酸棒杆菌中过表达自身来源的核糖体循环因子RRF得到。本发明的重组谷氨酸棒杆菌提高了乙酰氨基葡萄糖的产量，产量达到26.9g/L，为进一步代谢工程改造谷氨酸棒杆菌生产氨基葡萄糖奠定了基础。
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公开(公告)号：CN115960874A
公开(公告)日：2023-04-14
申请号：CN202310111425.9
申请日：2023-02-14
Applicant: 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸棒杆菌内源GlcNAc6P磷酸酶及提高GlcNAc产量的方法，具体涉及采用重组谷氨酸棒杆菌进行发酵生产，该重组谷氨酸棒杆菌过表达了如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，该蛋白编码GlcNAc6P磷酸酶，能将GlcNAc6P去磷酸化为GlcNAc。本发明通过机器学习的方式鉴定了谷氨酸棒杆菌内源GlcNAc胞内转运蛋白以及内源GlcNAc6P磷酸酶的编码基因，并根据筛选结果对菌株进行改造，显著提高了GlcNAc的产量。
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公开(公告)号：CN114591881A
公开(公告)日：2022-06-07
申请号：CN202210265171.1
申请日：2022-03-17
Applicant: 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种分泌几丁二糖脱乙酰酶的枯草芽孢杆菌及其应用，通过对几丁二糖脱乙酰酶Dac的表达载体pP43NMK‑D65的启动子及RBS序列进行改造，平衡菌株的生长和产物的生产，提高酶活；再通过过表达细胞壁合成蛋白EzrA，修复几丁二糖脱乙酰酶Dac在表达过程中对细胞壁的损害，实现几丁二糖脱乙酰酶Dac诱导后在发酵液中的持续性表达。与现有技术相比，本发明提供的菌株构建完成后生产性能稳定，几丁二糖脱乙酰酶胞外酶活可达6404.83U/mL，具有很好的应用前景，为酶转化法实现GlcN的工业化生产奠定了基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113355310A
公开(公告)日：2021-09-07
申请号：CN202110601441.7
申请日：2021-05-31
Applicant: 江南大学 , 山东润德生物科技有限公司
Abstract: 本发明涉及一种最适pH降低的几丁二糖脱乙酰酶组合突变体，通过分子模型和计算机分析预测几丁二糖脱乙酰酶表面电荷及酶活相关位点，再通过定点突变技术构建相关位点的突变体，筛选出不同位点突变时最适pH、酶活以及产物GlcN稳定性均较优的单突变体，构建其组合突变体，得到最适pH下降至6.0，酶活明显提高的组合突变体。
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公开(公告)号：CN110964090B
公开(公告)日：2021-02-19
申请号：CN201911362288.6
申请日：2019-12-26
Applicant: 江南大学 , 山东润德生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种促进N‑乙酰氨基葡萄糖生产的蛋白质起始因子IF3突变体及其应用。本发明的突变体是在氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的亲本上，将158位的天冬酰胺突变为谷氨酸，将161位的丙氨酸突变为精氨酸，将162位的天冬氨酸突变为甘氨酸，以及将163位的苯丙氨酸突变为丝氨酸。本发明提供了一种促进N‑乙酰氨基葡萄糖生产的蛋白质起始因子IF3突变体，以及能提高N‑乙酰氨基葡萄糖产量的基因工程菌株，通过过表达参与碳代谢调控的蛋白质起始因子IF3，提高了N‑乙酰氨基葡萄糖在胞外的积累量，其浓度最高可达28.3g/L，为进一步代谢工程改造谷氨酸棒杆菌生产氨基葡萄糖奠定了基础。本发明提供的重组谷氨酸棒杆菌构建方法简单，便于使用，具有很好地应用前景。
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公开(公告)号：CN111893129A
公开(公告)日：2020-11-06
申请号：CN202010687117.7
申请日：2020-07-16
Applicant: 江南大学 , 山东润德生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种提高枯草芽孢杆菌乙酰氨基葡萄糖产量的方法，本发明敲除验证得到关键磷酸酶YwpJ能够催化GlcNAc-6-P发生去磷酸化作用生成GlcNAc，通过过表达磷酸酶YwpJ，降低胞内磷酸糖的过量积累，消除了过量积累的磷酸糖对细胞的毒性作用，有效将磷酸糖分泌到胞外，从而使细胞生长得到改善；并进一步敲除GlcNAc合成前体降解途径关键基因murQ、nagBB，阻断前体物质的降解，减少碳流的浪费，使碳流更多的转化成产物，最终重组菌株FMIP34的GlcNAc产量达到26.1g/L，提高了61.1％，GlcNAc转化率达到0.483g/g葡萄糖。
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公开(公告)号：CN110964090A
公开(公告)日：2020-04-07
申请号：CN201911362288.6
申请日：2019-12-26
Applicant: 江南大学 , 山东润德生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种促进N-乙酰氨基葡萄糖生产的蛋白质起始因子IF3突变体及其应用。本发明的突变体是在氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的亲本上，将158位的天冬酰胺突变为谷氨酸，将161位的丙氨酸突变为精氨酸，将162位的天冬氨酸突变为甘氨酸，以及将163位的苯丙氨酸突变为丝氨酸。本发明提供了一种促进N-乙酰氨基葡萄糖生产的蛋白质起始因子IF3突变体，以及能提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的基因工程菌株，通过过表达参与碳代谢调控的蛋白质起始因子IF3，提高了N-乙酰氨基葡萄糖在胞外的积累量，其浓度最高可达28.3g/L，为进一步代谢工程改造谷氨酸棒杆菌生产氨基葡萄糖奠定了基础。本发明提供的重组谷氨酸棒杆菌构建方法简单，便于使用，具有很好地应用前景。
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公开(公告)号：CN117645985B
公开(公告)日：2024-06-04
申请号：CN202311593867.8
申请日：2023-11-27
Applicant: 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种乙酰氨基葡萄糖‑6磷酸磷酸酶突变体及其应用，属于生物技术领域。本发明以来源于多形拟杆菌Bacteroides thetaiotaomicron VPI‑5482的乙酰氨基葡萄糖‑6磷酸磷酸酶为出发序列，通过突变位点的筛选及验证，发现了一种能够提高此酶的底物专一性和催化活力的突变体，将该突变体引入基因工程大肠杆菌中后进行发酵验证，发现N‑乙酰氨基葡萄糖在胞外的积累量最高可达224g/L，与转化突变前pET28a‑BT4131的对照菌株相比，发酵液中乙酰氨基葡萄糖浓度提高了49.3％，在工业生产上具有十分广阔的应用前景。
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