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公开(公告)号：CN119752957A
公开(公告)日：2025-04-04
申请号：CN202411946161.X
申请日：2024-12-27
Applicant: 江南大学 , 山东润德生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种基于棒状杆菌内源重组酶的谷氨酸棒杆菌基因编辑工具及其应用，属于基因编辑技术领域。为了解决非模式菌株基因编辑效率低下的问题，本发明以C.glutamicum S9114为例，构建了以cpf1为基础的高效基因编辑工具，具体地：由于目前谷氨酸棒杆菌没有兼容性较好的基因编辑重组酶，且缺少效率良好的编辑系统，本发明通过blast迭代法进行筛选，为该菌株的基因编辑提供了一种来自C.aurimucosum ATCC 700975的新的工具酶CauR，其在非模式菌株谷氨酸棒杆菌S9114中的效率相较于现有的高效重组酶recET和red系统更高。在此基础上，我们对cpf1核酸酶和CauR重组酶进行了耦合，进一步显著提升了C.glutamicum S9114的同源重组能力，为非模式菌株的基因编辑提供了一种新的选择。
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公开(公告)号：CN119736295A
公开(公告)日：2025-04-01
申请号：CN202411985305.2
申请日：2024-12-31
Applicant: 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N9/14 , C07K14/245 , C12N15/70 , C12P19/26 , C12N1/21 , C12N15/55 , C12N15/61 , C12N15/54 , C12N15/53 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种GlcNAc6P感应元器件及促进乙酰氨基葡萄糖合成的方法。现有GlcNAc6P感应元器件存在泄露严重、响应范围小的问题，这导致利用GlcNAc6P感应元器件调控磷酸酶表达的过程中，在胞内GlcNAc6P未积累时磷酸酶也具有较高的表达强度，影响了前体物质的供给。此外，随着胞内GlcNAc6P浓度的快速提高，磷酸酶的表达量上限较低，无法满足胞内去磷酸化的需求，限制了GlcNAc产量的进一步提高。因此本发明对现有的GlcNAc6P感应元器件进行优化，对nagC结合序列进行定向进化以及优化阻遏蛋白nagC表达强度，降低传感器泄露表达水平的同时扩大其响应范围，从而更有效更严谨的调控磷酸酶的表达强度以适应发酵不同时期细胞内GlcNAc6P浓度的变化，为进一步代谢工程改造重组菌生产乙酰氨基葡萄糖奠定了基础。
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公开(公告)号：CN115960874A
公开(公告)日：2023-04-14
申请号：CN202310111425.9
申请日：2023-02-14
Applicant: 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸棒杆菌内源GlcNAc6P磷酸酶及提高GlcNAc产量的方法，具体涉及采用重组谷氨酸棒杆菌进行发酵生产，该重组谷氨酸棒杆菌过表达了如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，该蛋白编码GlcNAc6P磷酸酶，能将GlcNAc6P去磷酸化为GlcNAc。本发明通过机器学习的方式鉴定了谷氨酸棒杆菌内源GlcNAc胞内转运蛋白以及内源GlcNAc6P磷酸酶的编码基因，并根据筛选结果对菌株进行改造，显著提高了GlcNAc的产量。
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公开(公告)号：CN114591881A
公开(公告)日：2022-06-07
申请号：CN202210265171.1
申请日：2022-03-17
Applicant: 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种分泌几丁二糖脱乙酰酶的枯草芽孢杆菌及其应用，通过对几丁二糖脱乙酰酶Dac的表达载体pP43NMK‑D65的启动子及RBS序列进行改造，平衡菌株的生长和产物的生产，提高酶活；再通过过表达细胞壁合成蛋白EzrA，修复几丁二糖脱乙酰酶Dac在表达过程中对细胞壁的损害，实现几丁二糖脱乙酰酶Dac诱导后在发酵液中的持续性表达。与现有技术相比，本发明提供的菌株构建完成后生产性能稳定，几丁二糖脱乙酰酶胞外酶活可达6404.83U/mL，具有很好的应用前景，为酶转化法实现GlcN的工业化生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN113355310A
公开(公告)日：2021-09-07
申请号：CN202110601441.7
申请日：2021-05-31
Applicant: 江南大学 , 山东润德生物科技有限公司
Abstract: 本发明涉及一种最适pH降低的几丁二糖脱乙酰酶组合突变体，通过分子模型和计算机分析预测几丁二糖脱乙酰酶表面电荷及酶活相关位点，再通过定点突变技术构建相关位点的突变体，筛选出不同位点突变时最适pH、酶活以及产物GlcN稳定性均较优的单突变体，构建其组合突变体，得到最适pH下降至6.0，酶活明显提高的组合突变体。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110964090B
公开(公告)日：2021-02-19
申请号：CN201911362288.6
申请日：2019-12-26
Applicant: 江南大学 , 山东润德生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种促进N‑乙酰氨基葡萄糖生产的蛋白质起始因子IF3突变体及其应用。本发明的突变体是在氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的亲本上，将158位的天冬酰胺突变为谷氨酸，将161位的丙氨酸突变为精氨酸，将162位的天冬氨酸突变为甘氨酸，以及将163位的苯丙氨酸突变为丝氨酸。本发明提供了一种促进N‑乙酰氨基葡萄糖生产的蛋白质起始因子IF3突变体，以及能提高N‑乙酰氨基葡萄糖产量的基因工程菌株，通过过表达参与碳代谢调控的蛋白质起始因子IF3，提高了N‑乙酰氨基葡萄糖在胞外的积累量，其浓度最高可达28.3g/L，为进一步代谢工程改造谷氨酸棒杆菌生产氨基葡萄糖奠定了基础。本发明提供的重组谷氨酸棒杆菌构建方法简单，便于使用，具有很好地应用前景。
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公开(公告)号：CN111893129A
公开(公告)日：2020-11-06
申请号：CN202010687117.7
申请日：2020-07-16
Applicant: 江南大学 , 山东润德生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种提高枯草芽孢杆菌乙酰氨基葡萄糖产量的方法，本发明敲除验证得到关键磷酸酶YwpJ能够催化GlcNAc-6-P发生去磷酸化作用生成GlcNAc，通过过表达磷酸酶YwpJ，降低胞内磷酸糖的过量积累，消除了过量积累的磷酸糖对细胞的毒性作用，有效将磷酸糖分泌到胞外，从而使细胞生长得到改善；并进一步敲除GlcNAc合成前体降解途径关键基因murQ、nagBB，阻断前体物质的降解，减少碳流的浪费，使碳流更多的转化成产物，最终重组菌株FMIP34的GlcNAc产量达到26.1g/L，提高了61.1％，GlcNAc转化率达到0.483g/g葡萄糖。
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公开(公告)号：CN110964090A
公开(公告)日：2020-04-07
申请号：CN201911362288.6
申请日：2019-12-26
Applicant: 江南大学 , 山东润德生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种促进N-乙酰氨基葡萄糖生产的蛋白质起始因子IF3突变体及其应用。本发明的突变体是在氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的亲本上，将158位的天冬酰胺突变为谷氨酸，将161位的丙氨酸突变为精氨酸，将162位的天冬氨酸突变为甘氨酸，以及将163位的苯丙氨酸突变为丝氨酸。本发明提供了一种促进N-乙酰氨基葡萄糖生产的蛋白质起始因子IF3突变体，以及能提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的基因工程菌株，通过过表达参与碳代谢调控的蛋白质起始因子IF3，提高了N-乙酰氨基葡萄糖在胞外的积累量，其浓度最高可达28.3g/L，为进一步代谢工程改造谷氨酸棒杆菌生产氨基葡萄糖奠定了基础。本发明提供的重组谷氨酸棒杆菌构建方法简单，便于使用，具有很好地应用前景。
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公开(公告)号：CN119570704A
公开(公告)日：2025-03-07
申请号：CN202411757794.6
申请日：2024-12-03
Applicant: 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种生产N‑乙酰氨基葡萄糖的谷氨酸棒杆菌及其应用，属于合成生物学技术领域。具体地，本发明的谷氨酸棒杆菌过表达了tacM启动子控制的酿酒酵母S288C来源的GNA1基因、谷氨酸棒杆菌S9114来源的glmS基因和大肠杆菌K12 MG1655来源的yqab基因，同时具有基因组中nagA、nagB、ldhA、msccg、msccg2五个基因缺陷型，odhA、glnA两个基因单碱基突变型，其中odhA起始密码子由ATG突变为GTG，glnA编码第405位氨基酸的密码子由TAC突变为TTC。本发明通过阻断谷氨酸棒杆菌谷氨酸的外排并增强谷氨酸向谷氨酰胺的转化，以增强其前体的供应能力，由此得到了一条N‑乙酰氨基葡萄糖合成的最优途径，从而实现了N‑乙酰氨基葡萄糖在谷氨酸棒杆菌中的高效生产，具有重要的经济价值和社会意义。
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公开(公告)号：CN117645985A
公开(公告)日：2024-03-05
申请号：CN202311593867.8
申请日：2023-11-27
Applicant: 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种乙酰氨基葡萄糖‑6磷酸磷酸酶突变体及其应用，属于生物技术领域。本发明以来源于多形拟杆菌Bacteroides thetaiotaomicron VPI‑5482的乙酰氨基葡萄糖‑6磷酸磷酸酶为出发序列，通过突变位点的筛选及验证，发现了一种能够提高此酶的底物专一性和催化活力的突变体，将该突变体引入基因工程大肠杆菌中后进行发酵验证，发现N‑乙酰氨基葡萄糖在胞外的积累量最高可达224g/L，与转化突变前pET28a‑BT4131的对照菌株相比，发酵液中乙酰氨基葡萄糖浓度提高了49.3％，在工业生产上具有十分广阔的应用前景。
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