公开(公告)号：CN102181420A

公开(公告)日：2011-09-14

申请号：CN201110033473.8

申请日：2011-01-31

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 孙建和 ,  方圆子 ,  严亚贤 ,  陆承平 ,  王琰

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N15/74 ,  C12N15/66

Abstract: 一种生物技术领域的猪链球菌噬菌体裂解酶的乳酸乳球菌表达方法，利用PCR扩增猪链球菌烈性噬菌体SMP的裂解基因，获得目的片断，再将目的片断与pNZ8148载体连接，得到重组表达质粒，导入乳酸乳球菌L9000表达，获得一个分子量为52kDa的融合蛋白，得到有活性的裂解酶，获得的裂解酶，在体外可对多株临床分离的猪链球菌有裂解作用。

公开(公告)号：CN101865924A

公开(公告)日：2010-10-20

申请号：CN201010210195.4

申请日：2010-06-26

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 严亚贤 ,  王雨晨 ,  孙建和

IPC: G01N33/577 ,  G01N33/569 ,  G01N33/531

Abstract: 一种化学检测技术领域的基于免疫磁珠联合酶联免疫吸附试验检测伏马毒素的方法，通过制备伏马毒素-KLH偶联物和伏马毒素-OVA偶联物并将伏马毒素-KLH偶联物与免疫磁珠结合，制备成伏马毒素检测磁珠；再利用伏马毒素-KLH偶联物制备伏马毒素单克隆抗体，并与伏马毒素检测磁珠一并运用竞争ELISA方法进行伏马毒素分子检测，并通过磁性分离法获取伏马毒素检测磁珠，进行显色后通过酶标仪获得检测结果。本发明对低于检测极限的伏马毒素样品，通过免疫磁珠的富集作用以及磁珠在液体中充分扩散使得结合表面积扩大，从而能够间接改变检测极限，提高检测的灵敏度，避免漏检。

公开(公告)号：CN101831442A

公开(公告)日：2010-09-15

申请号：CN201010168940.3

申请日：2010-05-12

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 孙建和 ,  李宁 ,  严亚贤 ,  史一博 ,  陆承平

IPC: C12N15/33 ,  C12N15/70 ,  C07K14/005

Abstract: 一种生物材料技术领域的猪链球菌噬菌体穿孔素的制备方法，通过纯化得到猪链球菌2型烈性噬菌体，提取噬菌体的DNA；以步骤一所得DNA为模板，应用PCR扩增穿孔素基因；原核表达步骤二扩增所得DNA，得到融合蛋白；纯化融合蛋白，复性，得到穿孔素。本发明获得的纯化的有活性的穿孔素，它可在体外裂解多株猪链球菌或增强裂解酶的裂解效率。

公开(公告)号：CN101661043A

公开(公告)日：2010-03-03

申请号：CN200910307796.4

申请日：2009-09-27

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 严亚贤 ,  王君 ,  王元凯 ,  孙建和

IPC: G01N33/577

Abstract: 一种生物检测工程技术领域的用胶体金免疫层析试验快速检测伏马毒素的方法，包括如下步骤：将伏马毒素半抗原通过戊二醛法分别与KLH和OVA偶联；利用所得伏马毒素-KLH偶联物，采用常规方法制备抗伏马毒素的单克隆抗体；用柠檬酸三钠还原法制备40nm的胶体金，用该胶体金标记经过透析除盐处理的抗伏马毒素的单克隆抗体；将得到的单克隆抗体蛋白喷涂到金标垫上，将伏马毒素-OVA偶联物喷涂到T线，兔抗鼠的单克隆抗体喷涂到C线，组装成试纸条，干燥；将待测样品用甲醇提取，离心，取上清，将上清滴入试纸条的样本槽中，获取T线和C线的显色，鉴定，得到结果。本发明的方法检测特异性强，准确率高；检测速度快，所需时间短，只需5～10分钟。

公开(公告)号：CN100348726C

公开(公告)日：2007-11-14

申请号：CN200510027317.5

申请日：2005-06-30

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 孙建和 ,  王琰 ,  陆承平 ,  严亚贤 ,  陆苹

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/66 ,  C12N15/70 ,  C12N15/33 ,  C07K14/005

Abstract: 一种H9N2型禽流感NS1蛋白表达质粒pET-NS1。提供的pET-NS1表达质粒是通过将pET-32a(+)和经PCR扩增后含有限制性酶切位点的禽流感NS1基因酶切，连接，获得的表达质粒；pET-NS1表达质粒转化大肠杆菌BL21种，用IPTG诱导，即可表达出H9N2型禽流感NS1蛋白表达质粒pET-NS1的蛋白翻译区核苷酸序列，在这一段序列中包含H9N2型禽流感病毒NS1蛋白的核苷酸序列；还可表达出禽流感NS1蛋白表达质粒pET-NS1的蛋白翻译区氨基酸序列，这一段序列含有H9N2型禽流感NS1蛋白的氨基酸序列。本发明诱导表达的适用温度范围广，方便了样品的鉴定和纯化，使蛋白结构不受破坏。克服了纯化蛋白容易降解的缺点，可以在-40℃长时间保存。所表达的NS1蛋白还可用于禽流感病毒野毒感染的检测。

公开(公告)号：CN1996021A

公开(公告)日：2007-07-11

申请号：CN200610148212.X

申请日：2006-12-28

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 孙建和 ,  王琰 ,  陆承平 ,  严亚贤

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/543

Abstract: 一种鉴别诊断禽流感感染鸡群的酶联免疫吸附试验方法，属于生物工程技术领域。本发明首先将H9N2型禽流感病毒进行扩增，获得目的片断，将该片断与载体连接，得到重组表达质粒，导入大肠杆菌表达，获得一个融合蛋白；该融合蛋白经过纯化，得到H9N2型禽流感病毒NS1蛋白，将该蛋白作为抗原包被酶标反应板，建立酶联免疫吸附试验方法测定待检血清中与抗原反应的抗体水平，通过统计学分析确定酶联免疫吸附试验阴阳性判定的临界值、最少的检测样本数；最后根据鸡群样本的酶联免疫吸附试验平均OD值大小，从群体水平鉴别诊断鸡群是否被禽流感野毒感染。本发明方法从总体鉴别诊断，降低了非特异性反应，为及时诊断、预防禽流感提供科学依据。

公开(公告)号：CN118325966A

公开(公告)日：2024-07-12

申请号：CN202410426781.4

申请日：2024-04-10

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 严亚贤 ,  杨娟 ,  孙建和 ,  程玉强

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10 ,  C12Q1/02 ,  A61K45/00 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明公开了SNX19基因在调控猪德尔塔病毒复制中的应用，属于生物技术领域。本发明通过shRNA干扰、过表达和在LLC‑PK1细胞中构建SNX19敲除细胞系的方法，首次证实了敲除SNX19基因或抑制SNX19基因的表达，能够显著抑制PDCoV在宿主细胞中的增殖；SNX19基因的过表达，可促进PDCoV在宿主细胞中的增殖，说明宿主细胞中SNX19是与PDCoV增殖相关的重要宿主因子，在研制细胞疫苗中发挥重要作用。病毒增殖效率的提高，可直接提高疫苗生产企业的经济效益。另一方面，以SNX19作为药物靶标，能够进一步筛选靶向抑制SNX19的药物，将其作为候选药物，可开发出有效的抗猪德尔塔病毒药物。

公开(公告)号：CN108004270B

公开(公告)日：2021-06-18

申请号：CN201711195597.X

申请日：2017-11-24

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 孙建和 ,  刘云霞 ,  程玉强 ,  严亚贤

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/66 ,  C12Q1/66

Abstract: 本发明提供一种利用双荧光素酶报告基因检测鸭IFN‑β启动子活性的方法，包括以下步骤：A、构建含鸭IFN‑β启动子靶序列的萤火虫荧光素酶重组质粒；B、将含鸭IFN‑β启动子靶序列的萤火虫荧光素酶重组质粒与刺激物、内参质粒及脂质体预混后转染目标细胞；所述内参质粒为海参荧光素酶质粒；C、将转染后的目标细胞进行培养后裂解，检测荧光素酶活性，即得鸭IFN‑β启动子活性。该方法操作简单易行，通量高，且具有较高的可重复性和准确度，为研究鸭IFN‑β通路提供了有效的检测工具。

公开(公告)号：CN111226986A

公开(公告)日：2020-06-05

申请号：CN202010064083.6

申请日：2020-01-20

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 严亚贤 ,  谢平林 ,  孙建和

IPC: A01N63/40 ,  A01N37/46 ,  A01N25/06 ,  A01P1/00 ,  C12N7/00 ,  C12N9/88 ,  A61L2/22 ,  A61L9/14 ,  A61L101/54 ,  C12R1/92

Abstract: 本发明公开了含养殖环境噬菌体组合物的喷雾消毒剂、其制备方法和应用，该喷雾消毒剂包含体积比为0.1～100:1的总浓度大于1010PFU/mL的噬菌体或其组合物和浓度为100.0μg/mL的猪链球菌裂解酶LY7917，该噬菌体来源于养殖环境，且选自大肠杆菌噬菌体Ecp2、大肠杆菌噬菌体E20-1或金黄色葡萄球菌噬菌体SLPW中的一种或两种以上组合。本发明的喷雾消毒剂采用喷雾杀菌方式可以有效发挥噬菌体和裂解酶协同灭菌作用，显著降低畜舍地面、空气及饲槽的细菌总数，消毒效率总体优于化学消毒剂戊二醛癸甲溴铵溶液，是一种绿色环保的畜禽养殖环境用消毒剂。

公开(公告)号：CN111089956A

公开(公告)日：2020-05-01

申请号：CN202010045027.8

申请日：2020-01-16

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 严亚贤 ,  侯思露 ,  孙建和

IPC: G01N33/533 ,  G01N33/558 ,  G01N33/577 ,  G01N33/543

Abstract: 本发明公开了三重定量检测镰刀菌毒素的荧光微球免疫层析试纸条、其制备方法和应用，包括：将分别包被有ZEN-BSA、DON-BSA、FB1-BSA的检测线和羊抗鼠IgG抗体的控制线的硝酸纤维素膜、喷涂有FB1、DON、ZEN的单克隆抗体-荧光微球标记物混合物的结合垫、样品垫和吸水垫按顺序依次粘贴于底板上，组装后切小条得到。本发明将三种镰刀菌毒素的检测整合在一个试纸条上，形成的多通道检测效率高，且所得试纸条特异性好、灵敏度高，操作简单，非专业人员也可使用，满足粮食储存销售机构、出入境检疫、海关、生产企业、监督部门等快速准确地判断FB1、DON和ZEN毒素具体含量的要求，便于基层推广和运用。