公开(公告)号：CN112786101B

公开(公告)日：2024-11-12

申请号：CN201911083366.9

申请日：2019-11-07

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 沈建忠 ,  王战辉 ,  于雪芝 ,  温凯 ,  江海洋 ,  张素霞 ,  余文博

IPC: G16B5/00 ,  G16B15/00 ,  C07K16/44

Abstract: 本发明提供一种热稳定性抗体的制备方法，包括：1)构建抗体的空间模型，并对模型进行评价；2)确定关键氨基酸的位点并进行定点突变；3)通过软件模拟计算评估突变前后抗体结合能的变化。进一步地，本发明以磺胺类药物单链抗体scFv4C7为例，通过序列比对、结构模拟及优化、虚拟氨基酸突变等，从理论上探讨影响抗体热稳定性的关键因素，结合生物学实验结果显示，利用本方法获得的抗体突变体，其热稳定性均得到不同程度地提高，为抗体分子热稳定性的改造提供理论依据。

公开(公告)号：CN114166807B

公开(公告)日：2023-12-12

申请号：CN202111387637.7

申请日：2021-11-22

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 温凯 ,  王战辉 ,  沈建忠 ,  江海洋 ,  余文博 ,  于雪芝 ,  柯跃斌 ,  张英杰

IPC: G01N21/64

Abstract: 本发明提供一种用于检测多粘菌素的荧光偏振免疫分析方法。所述方法包括：1)配制不同浓度的多粘菌素标准品溶液，将多粘菌素标准品溶液分别与荧光标记物溶液和多粘菌素单克隆抗体溶液混合孵育，进行竞争反应，测定所得体系的荧光偏振值；以测定的荧光偏振值为纵坐标，多粘菌素标准品溶液的浓度为横坐标，绘制标准曲线；以待测样品代替步骤1)中的多粘菌素标准品，按照步骤1)中的方法，测定待测样品的荧光偏振值，根据步骤1)中的标准曲线，计算出待测样品中多粘菌素的浓度。本发明提供的多粘

公开(公告)号：CN116813512A

公开(公告)日：2023-09-29

申请号：CN202311099212.5

申请日：2023-08-30

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 王嘉欣 ,  何通 ,  温凯 ,  伍秋徉 ,  吴若骐 ,  王锦添 ,  李璐欣 ,  高洋 ,  李宗睿 ,  王战辉 ,  于雪芝 ,  沈建忠

IPC: C07C317/32 ,  C07K14/765 ,  C07K1/107 ,  C07K16/44 ,  G01N33/53 ,  C07C315/04

Abstract: 本发明涉及一种氟苯尼考半抗原及其制备方法和应用，所述氟苯尼考半抗原结构式如式（Ⅰ）所示。本发明对氟苯尼考结构进行了改造，得到氟苯尼考半抗原，并与载体蛋白偶联制备了抗原。使用所制备的抗原免疫新西兰大白兔可获得灵敏度高、特异性强的多克隆抗体。在此之前没有使用本研究中的半抗原、抗原制备抗体的相关信息。利用本发明提供的半抗原与载体蛋白的偶联物制备氟苯尼考抗体，开始免疫后抗体效价上升速度较快、然后慢慢趋向稳定，抗体的灵敏度逐渐提高、最终达到稳定。本发明提供的氟苯尼考半抗原和抗原的制备过程简单、经济、实用价值高，在兽药残留检测中具有良好的应用前景。

公开(公告)号：CN116768823A

公开(公告)日：2023-09-19

申请号：CN202310642586.0

申请日：2023-06-01

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 余文博 ,  沈建忠 ,  王战辉 ,  温凯 ,  于雪芝 ,  江海洋 ,  窦磊娜

IPC: C07D285/14 ,  C09K11/06 ,  G01N21/64 ,  A61K41/00 ,  A61K31/433 ,  A61P31/04

Abstract: 本发明公开了一种聚集诱导发光抗菌光敏剂及其制备方法与应用，所述光敏剂为化合物TBP‑QA，所述化合物TBP‑QA的结构式为：#imgabs0#本发明制备的化合物TBP‑QA提供了一种新的聚集诱导发光材料，所述化合物能够在荧光成像、光动力治疗、制备革兰氏阳性菌抗菌剂、制备LPS缺失的革兰氏阴性菌抗菌剂、制备治疗MRSAT144导致的器官病变的药物中、制备治疗腹膜炎‑败血症的药物等领域应用。

公开(公告)号：CN116240188A

公开(公告)日：2023-06-09

申请号：CN202111494334.5

申请日：2021-12-08

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 沈建忠 ,  王战辉 ,  于雪芝 ,  江海洋 ,  温凯 ,  余文博

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  G16B20/30 ,  G16B20/50 ,  G16B30/00 ,  G01N33/53 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种热稳定性提高的二氢蝶酸合成酶突变体的制备方法。所述制备方法包括获得受体蛋白‑DHPPP晶体复合物与SMM作用的氨基酸位点；对配体以内的氨基酸分别进行热稳定性和亲和力的单点突变；获得受体蛋白热稳定性的关键氨基酸；通过软件模拟关键氨基酸突变前后的稳定力及亲和力确定突变氨基氨酸；基于所述突变氨基酸，构建热稳定性受体蛋白的氨基酸序列。结合生物学实验结果显示，利用本发明提供的制备方法获得的受体蛋白突变体，其热稳定性得到提高，为受体蛋白热稳定性的改造提供理论依据。

公开(公告)号：CN114032318B

公开(公告)日：2023-06-09

申请号：CN202111440024.5

申请日：2021-11-30

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 沈建忠 ,  汪洋 ,  陶金 ,  温凯 ,  刘德俊

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6858 ,  C12Q1/10 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种检测肠杆菌科细菌中是否含有能够介导替加环素耐药的tet(X)基因变异体的方法。本发明是基于Chelex‑100裂解法建立了无需使用离心机的细菌DNA提取法，进一步将该细菌DNA提取方法、RAA和侧流层析试纸条结合构建了tet(X4)耐药基因和/或tet(X6)耐药基因的快速可视化检测方法。该检测方法具有快速、灵敏度高、特异性强和能够进行现场检测的技术优点，适用于临床及畜禽养殖业替加环素tet(X4)耐药基因和/或tet(X6)耐药基因流行情况的监测。本发明具有重要的应用价值。

公开(公告)号：CN113968804B

公开(公告)日：2022-12-02

申请号：CN202010710937.3

申请日：2020-07-22

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 江海洋 ,  温凯 ,  张艳芳 ,  李建成 ,  余文博 ,  王战辉 ,  郑丕苗

IPC: C07C317/44 ,  C07C315/02 ,  C07K14/765 ,  C07K14/77 ,  C07K14/795 ,  C07K16/44 ,  G01N33/52 ,  G01N33/53 ,  G01N33/543 ,  G01N33/577

Abstract: 本发明公开了一种莫奈太尔砜的半抗原、人工抗原及其制备方法与应用。所述莫奈太尔砜半抗原的结构式如式I所示，可按照下述方法制备：在冰醋酸中，采用氧化氢氧氧化对三氟甲硫基苯甲酸即得。本发明提供了莫奈太尔砜半抗原及人工抗原，为高灵敏度抗莫奈太尔砜抗体的制备奠定基础；最终，筛选获得性质最优抗体，效价最高可达4×104，灵敏度为2.6μg/L。本发明所提供的莫奈太尔砜半抗原及人工抗原的合成方法简单高效，所需化学试剂价格低廉，获得的抗体灵敏度高，完全可用于免疫分析中，在兽药残留检测中具有重要意义。

公开(公告)号：CN115353567A

公开(公告)日：2022-11-18

申请号：CN202211015327.7

申请日：2022-08-23

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 余文博 ,  沈建忠 ,  王战辉 ,  温凯 ,  于雪芝 ,  江海洋 ,  寇家倩 ,  郭利娜

IPC: C07K16/44 ,  C12N5/078 ,  C12N5/09 ,  C12N5/20 ,  C12N15/02 ,  C12N13/00 ,  G01N33/577 ,  G01N33/53 ,  G01N33/558 ,  G01N33/543

Abstract: 本发明提供一种基于细胞分选与微流控电融合技术的单克隆抗体制备方法，包括：1)针对特定化合物，设计人工抗原；2)用人工抗原免疫实验动物，分离淋巴细胞；3)用免疫磁珠法对淋巴细胞进行分选，获得稀有浆细胞；4)将分选的稀有浆细胞与骨髓瘤细胞混合，采用微流控电融合芯片进行细胞融合，从融合细胞中筛选出分泌抗该化合物的单克隆抗体的杂交瘤细胞。本方法操作简单，为高性能单克隆抗体的精准制备奠定基础，在科研与实际生产中具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN115327105A

公开(公告)日：2022-11-11

申请号：CN202210980177.7

申请日：2022-08-16

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 江海洋 ,  熊进城 ,  覃麟茜 ,  王嗣涵 ,  张帅 ,  沈建忠 ,  王战辉 ,  温凯 ,  王梓乐

IPC: G01N33/543 ,  G01N33/58 ,  G01N33/53 ,  G01N33/535 ,  G01N33/577

Abstract: 本发明公开了一种基于Pd@Pt纳米酶直接标记一抗的一步法ELISA检测小分子化学污染物的方法。它包括如下步骤：将靶标小分子物质全抗原包被到酶标板上；包被后加入封闭液；向封闭后的酶标板中分别加入待检样品溶液和靶标小分子物质标准品溶液，然后均加入Pd@Pt纳米酶免疫探针，发生竞争性免疫反应；然后加入底物显色，显色完毕后终止免疫反应；测定显色后溶液的吸光度值，以靶标小分子物质标准品溶液浓度的对数形式为横坐标、以吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，根据待检样品溶液经显色后溶液的吸光度值和标准曲线计算，即可得到待检样品溶液中靶标小分子物质的含量。本发明能实现对靶标小分子污染物高灵敏、高特异、高通量的一步法快速检测。

公开(公告)号：CN114487404A

公开(公告)日：2022-05-13

申请号：CN202111630811.6

申请日：2021-12-28

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 温凯 ,  沈建忠 ,  王战辉 ,  汪洋 ,  刘德俊 ,  鲁智敏 ,  马立才 ,  贾良曦 ,  江海洋 ,  于雪芝 ,  余文博 ,  陶金

IPC: G01N33/573 ,  G01N33/569 ,  G01N33/558

Abstract: 本发明公开了用于检测细菌内碳青霉烯酶的免疫层析试纸条及检测方法。用于检测细菌内碳青霉烯酶的免疫层析试纸条，包括依次粘贴在底板上的样品垫、NC膜、吸水垫和底板，其中NC膜上设有检测线和质控线，检测线包被有青霉素‑BSA，质控线包被有His融合标签抗体。本发明还提供用于检测细菌内碳青霉烯酶的试剂盒，包括细菌裂解液、反应孔I、II和所述试纸条；反应孔I包被有美罗培南，反应孔II包被有胶体金标记的PBP 4’受体蛋白复合物。本发明选用性质稳定的美罗培南作为底物，以金标青霉素结合蛋白PBP 4’作为受体，通过检测底物消耗情况间接检测样品中碳青霉烯酶的有无。为细菌内碳青霉烯酶的快速检测提供有力技术手段。