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公开(公告)号：CN118252181A
公开(公告)日：2024-06-28
申请号：CN202410683603.X
申请日：2024-05-30
申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
发明人： 苏小运 , 杨道鑫 , 姚斌 , 王苑 , 罗会颖 , 王晓璐 , 黄火清 , 张杰 , 涂涛 , 于会民 , 秦星 , 杨浩萌 , 张伟 , 关菲菲 , 刘晓青 , 刘波 , 田健 , 徐欣欣 , 张红莲 , 赵勇
摘要： 本发明涉及农业生物技术领域，具体涉及一种用于杀灭沙门氏菌的复合酶系及其应用。本发明的复合酶系包括纤维素酶、高丝氨酸内酯酶AiiO、磷酸化酶LsrK以及沙门氏菌素SalE1a。该复合酶系通过降解沙门氏菌生物膜、破坏沙门氏菌群体感应系统以及杀灭沙门氏菌病原体，有效清除沙门氏菌的鸡肉污染，改善肉品质，延长鸡肉保鲜期；同时在在小鼠沙门氏菌感染模型中，使用该复合酶系可抑制沙门氏菌生长、定植以及致病，降低炎症反应，保护肠道屏障，恢复肠道菌群稳态。
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公开(公告)号：CN117264990B
公开(公告)日：2024-02-06
申请号：CN202311540079.2
申请日：2023-11-20
申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
摘要： 本发明涉及农业生物技术领域，具体涉及一种由4‑异丙基苯甲酸诱导的启动子时序性调控RecET和Cas12a表达的谷氨酸棒杆菌基因编辑质粒及编辑方法。本发明首先构建了可由4‑异丙基苯甲酸为诱导剂调控目的基因时序表达的启动子PH10‑CuO；进一步构建了用PH10‑CuO调控2个关键基因编辑元件（recET、cas12a）的表达单元PH10‑CuO/recET和PH10‑CuO/cas12a。此外，构建了含有结合于启动子PH10‑CuO上操纵基因CuO的阻遏蛋白CymR表达单元和谷氨酸棒杆菌温度敏感的复制蛋白的质粒，将PH10‑CuO/recET和PH10‑CuO/cas12a与质粒整合后构建高效的谷氨酸棒杆菌(56)对比文件Zhao NN等. Context Sensitive Links 1of 1 Multiplex gene editing and large DNAfragment deletion by the CRISPR/Cpf1-RecE/T system inCorynebacteriumglutamicum. JOURNAL OF INDUSTRIALMICROBIOLOGY & BIOTECHNOLOGY.2020,第47卷(第8期),599-608.Wang B等.A RecET-assisted CRISPR-Cas9genome editing in Corynebacteriumglutamicum.MICROBIAL CELL FACTORIES.2018,第17卷63.
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公开(公告)号：CN117264990A
公开(公告)日：2023-12-22
申请号：CN202311540079.2
申请日：2023-11-20
申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
摘要： 本发明涉及农业生物技术领域，具体涉及一种由4‑异丙基苯甲酸诱导的启动子时序性调控RecET和Cas12a表达的谷氨酸棒杆菌基因编辑质粒及编辑方法。本发明首先构建了可由4‑异丙基苯甲酸为诱导剂调控目的基因时序表达的启动子PH10‑CuO；进一步构建了用PH10‑CuO调控2个关键基因编辑元件（recET、cas12a）的表达单元PH10‑CuO/recET和PH10‑CuO/cas12a。此外，构建了含有结合于启动子PH10‑CuO上操纵基因CuO的阻遏蛋白CymR表达单元和谷氨酸棒杆菌温度敏感的复制蛋白的质粒，将PH10‑CuO/recET和PH10‑CuO/cas12a与质粒整合后构建高效的谷氨酸棒杆菌基因编辑的基础质粒。
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公开(公告)号：CN116904428A
公开(公告)日：2023-10-20
申请号：CN202311159462.3
申请日：2023-09-11
申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
IPC分类号： C12N9/52
摘要： 本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种改良高温碱性蛋白酶AprThc的稳定性的方法及突变体。本申请对碱性蛋白酶AprThc进行L362I、K211G和/或R173G突变。本申请对高温碱性蛋白酶AprThc进行分子改良，以提升其热稳定性和pH稳定性，对于提升蛋白酶的综合性能，降低蛋白酶的使用成本具有重要意义，为蛋白酶的性质改良提供了有效的技术方法。
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公开(公告)号：CN116286941B
公开(公告)日：2023-09-29
申请号：CN202310574853.5
申请日：2023-05-22
申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
摘要： 本发明涉及基因编辑领域，具体涉及一种毕赤酵母基因编辑单一质粒及改进的基因编辑方法。根据本申请的技术方案，在构建基因编辑质粒时只需两轮PCR和一次无缝重组即可完成基因编辑质粒的构建，第一轮PCR用于扩增左右同源序列、第二轮PCR用于将左右同源序列进行融合。在删除基因时，只需转入单一的基因编辑质粒即可。完成基因编辑后，将阳性转化子接入含有鼠李糖的培养基中培养，通过鼠李糖诱导启动子调控毒性蛋白MazF表达，即可快速消除细胞中质粒pPICC02及其衍生体；相对于现有的在无选择压力下多次传代来消除质粒的策略，此法快速简洁。基于本申请的基因编辑质粒的基因编辑方法可实现基因快速高效编辑，有很好的应用潜力。
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公开(公告)号：CN116334042A
公开(公告)日：2023-06-27
申请号：CN202310378038.1
申请日：2023-04-11
申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
摘要： 本发明涉及农业生物技术领域，具体涉及改良中性甘露聚糖酶PLM5A稳定性的方法及突变体。本申请对中性甘露聚糖酶PLM5A进行K52V、T266D、W291S、A93LK205R、F63Y、D66Y、S283L、G288S和/或L292I突变。突变体的最适温度提高，热稳定性增加，具有更强的耐酸性。
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公开(公告)号：CN114807093B
公开(公告)日：2022-09-27
申请号：CN202210713248.7
申请日：2022-06-22
申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
摘要： 本申请涉及基因工程领域，具体涉及一种通过C端添加融合肽段提高木聚糖酶和植酸酶热稳定性的方法。本发明首次发现，通过在GH11家族木聚糖酶和植酸酶C端添加特定融合肽段的方法，可显著提高木聚糖酶和植酸酶的热稳定性，对于其他类型木聚糖酶、植酸酶及其他工业酶类的热稳定性分子改造具有重要的指导意义。
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公开(公告)号：CN114315997B
公开(公告)日：2022-05-31
申请号：CN202210260558.8
申请日：2022-03-17
申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
IPC分类号： C07K14/335 , C12N15/31 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12R1/19
摘要： 本发明涉及农业生物技术领域，具体涉及一种调控含有WxL结构域的蛋白Lb630结合不可溶性纤维素和木聚糖的能力的方法。本发明提供了一个含有单个的WxL结构域的蛋白，即来自短乳杆菌的Lb630，其能够与不溶性纤维素和木聚糖结合，所述方法包括以下步骤：对氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的蛋白质的第58、89和/或184位氨基酸进行突变，或对氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的蛋白质的第30、61和/或156位氨基酸进行突变。
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公开(公告)号：CN114369173A
公开(公告)日：2022-04-19
申请号：CN202210279186.3
申请日：2022-03-22
申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
摘要： 本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种利用融合蛋白标签促进人颗粒溶素及动物NK lysin在毕赤酵母中表达的方法。所述方法包括将经密码子优化的SUMO基因与人颗粒溶素基因及动物NK lysin基因融合表达的步骤。申请通过筛选SUMO标签以及优化linker序列，实现在毕赤酵母中高效表达人颗粒溶素及不同动物来源NK lysin的融合蛋白。
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公开(公告)号：CN113980940B
公开(公告)日：2022-03-25
申请号：CN202111585620.2
申请日：2021-12-23
申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
摘要： 本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种提高双功能纤维素酶的催化效率的方法及突变体、基因和应用。本发明以GH5‑5家族Bispora sp.MEY‑1来源的具有纤维素酶与甘露聚糖酶活性的双功能纤维素酶BsCel5B作为母本，发现位点Thr100对酶的双功能特性有着重要的影响。突变为Thr100Asn与Thr100Cys后，可获得纤维素酶活性提高突变体；突变为Thr100Ile、Thr100Leu、Thr100Val和Thr100Ser后，可获得的甘露聚糖酶活性提高的突变体。在此改造条件下，纤维素酶突变体对纤维素底物的比活力最高比突变前提高了150%，甘露聚糖酶比活力最多提高了81%。突变体更为优越的双功能的特性比野生型有着更为广阔的应用空间，也奠定了其在工业生产领域的应用前景。
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