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公开(公告)号：CN105907762A
公开(公告)日：2016-08-31
申请号：CN201610547147.1
申请日：2016-07-12
申请人： 云南农业大学
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/82 , A01H5/00
CPC分类号： C12N9/90 , C12N15/8222 , C12Y502/01008
摘要： 本发明公开一种水稻亲环素基因OsCYP2的启动子及其应用。该启动子通过采用PCR技术从水稻日本晴(Oryza sativa L.ssp.japonica C.V.Nipponbare)基因组中克隆得到，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。该启动子驱动GUS基因的表达活性比pACTIN1::GUS、pUBI1::GUS和pCaMV35S::GUS高。该启动子可应用于作物分子改良育种领域以及植物基因工程研究领域。
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公开(公告)号：CN105907761A
公开(公告)日：2016-08-31
申请号：CN201610546803.6
申请日：2016-07-12
申请人： 云南农业大学
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/82 , A01H5/00
CPC分类号： C07K14/825 , C12N15/8222
摘要： 本发明涉及一种水稻金属硫蛋白OsMT2bL基因启动子及其应用。该启动子通过采用PCR技术从“水稻黎榆B(Oryza sativa L.ssp.japonica C.V.LiyuB)”基因组中克隆得到一个植物MT?2类基因Metallothionein2b?Like(OsMT2bL)的启动子序列，全长2063bp，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。该启动子驱动GUS基因的表达活性比CaMV35S基因启动子高出3倍以上。本发明水稻金属硫蛋白OsMT2bL基因启动子pMT2bL可应用于植物转基因工程及作物分子改良育种领域。
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公开(公告)号：CN105420343A
公开(公告)日：2016-03-23
申请号：CN201610000854.9
申请日：2016-01-04
申请人： 云南农业大学
IPC分类号： C12Q1/24
CPC分类号： C12Q1/24
摘要： 本发明公开了一种简易有效的气传植物真菌病害孢子的单孢分离法，从孢子捕捉到分离包括以下步骤：1）制备孢子捕捉工具；2）利用涂有凡士林的玻片捕捉孢子；3）显微镜下对玻片上的可见杂物除杂；4）利用玻璃涂布器从玻片上粘取白色凡士林涂布于4%水琼脂上，反复操作多次稀释孢子浓度；5）在显微镜下挑取单孢子，实现单孢分离；本发明采用玻片涂凡士林捕捉空气中的孢子，然后从玻片上分离气传孢子，将空气中捕捉到的气传孢子通过涂布稀释法从玻片上分离下来；避免了细菌污染、便于操作、技术要求低、分离纯度高、技术简便、成本低，提供了一种很好的气传真菌孢子分离方法。
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公开(公告)号：CN105379685A
公开(公告)日：2016-03-09
申请号：CN201510827391.9
申请日：2015-11-25
申请人： 云南农业大学
IPC分类号： A01K67/033
CPC分类号： A01K67/033
摘要： 一种保藏日本追寄蝇蛹的方法，属昆虫养殖技术领域。日本追寄蝇寄生至寄主后，于22℃～30℃下将寄主饲养至化蛹，以0.2～0.5℃/h降温至饲养温度15～18℃，保持该环境直至寄主体内的追寄蝇幼虫钻出体内化蛹；收集从寄主体内钻出的追寄蝇蛹，用脱脂棉包裹，以含水量重量比为4～7％的石英砂填埋至没过蛹体0.5～2mm，以2～5℃/h的速度降温至5℃～8℃，保持23～25小时，继续以2～5℃/h的速度降温至-2℃～2℃，进行保藏。保藏后可按特定条件复苏，自然羽化为成虫。蛹冷藏保存时间增加到300～480天，还提高了羽化成功率。
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公开(公告)号：CN105181965A
公开(公告)日：2015-12-23
申请号：CN201510602926.2
申请日：2015-09-21
申请人： 云南农业大学
IPC分类号： G01N33/569
CPC分类号： G01N33/56961
摘要： 本发明公开了一种检测稻瘟菌效应蛋白从水稻根部转移至叶缘的方法，它涉及植物保护和生物技术领域，它将稻瘟病菌效应蛋白基因表达产物于4℃离心机离心收集菌体，用新鲜配制的缓冲液悬浮菌体，在冰水浴上进行超生破碎细胞后离心收集上清，将该原核表达产物，利用GST纯化柱纯化，将纯化后的表达产物按照5.0mg/ml的浓度处理感病水稻品种丽江新团黑谷的根尖0.5cm处6h，灭菌水漂洗4h，将处理后的水稻植株的叶片进行石蜡切片，用免疫细胞化学方法处理水稻叶片切片，共聚焦显微镜观察根尖皮层细胞微管骨架；它鉴定到了一种从水稻根部转移至地上部叶缘的稻瘟病菌效应蛋白，可为今后进一步研究提供重要的实验依据。
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公开(公告)号：CN105177145A
公开(公告)日：2015-12-23
申请号：CN201510604347.1
申请日：2015-09-21
申请人： 云南农业大学
CPC分类号： C12Q1/6895
摘要： 本发明公开了一种检测稻瘟菌基因增强稻瘟病菌株致病力的方法，它涉及植物保护和生物技术领域，调查水稻抗感反应、real-time RT-PCR分析水稻早期响应的防御相关基因表达以及qPCR检测病斑的真菌相对生长量。基因的原核表达产物按照1.0μg/ml~6.0 μg/ml浓度喷雾水稻叶片24h再接种强/弱致病菌株，调查抗感反应以及real-time RT-PCR分析水稻防御相关基因表达；再利用该基因的过表达菌株离体接种水稻叶片，调查抗感反应、real-time RT-PCR分析水稻防御相关基因表达以及qPCR分析病斑上的真菌相对生长量。它可全面准确地明确病原菌效应蛋白基因提高病原菌侵染力，最终达到为今后测定病原菌效应蛋白提高病原菌侵染力的方法提供准确全面的方法的目的。
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公开(公告)号：CN105177107A
公开(公告)日：2015-12-23
申请号：CN201510602667.3
申请日：2015-09-21
申请人： 云南农业大学
摘要： 本发明公开了一种检测稻瘟菌基因促进稻瘟病菌菌丝生长和产孢的方法，它涉及植物保护和生物技术领域，它将基因的原核表达产物加于培马铃薯蔗糖养基中，再将菌落接种于含有原核表达产物的PSA培养基中于28℃振荡培养箱中培养三天，过滤菌丝烘干称重；同时收集滤液，进行孢子计数。它提供一种更为简便、快速的确定病菌基因对病菌自身的影响，为更准确分析基因功能奠定重要的实验基础。
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公开(公告)号：CN103175810B
公开(公告)日：2015-09-02
申请号：CN201210554731.1
申请日：2012-12-05
申请人： 云南农业大学
CPC分类号： G01N21/6458
摘要： 本发明公开了一种观测融合蛋白长距离转运至水稻叶芽的方法，该方法将GFP融合蛋白处理水稻根尖后，处理过根尖的水稻植株叶芽进行冷冻切片，切片后PI荧光染料进行染色，共聚焦显微镜直接观测GFP融合蛋白从水稻根尖转运至叶芽。该方法利用GFP融合蛋白处理水稻根尖0.5cm处，叶芽被冷冻切片后PI染色，共聚焦显微镜观测GFP融合蛋白从水稻根尖转运至叶芽，能直接定性地了解GFP融合蛋白在水稻植株内的长距离转运情况。GFP融合蛋白直接处理水稻根尖0.5cm处，共聚焦显微镜观测GFP融合蛋白转运至叶芽可为进一步开展效应蛋白能引起水稻系统防御反应提供非常强有力的证据。该方法简便、准确、快速。
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公开(公告)号：CN102839147B
公开(公告)日：2014-12-17
申请号：CN201210323189.9
申请日：2012-08-28
申请人： 云南农业大学
摘要： 本发明公开了一种以三七为原料制作适宜恶疫霉菌产生游动孢子的液体培养基，具体制作方法为，一年生三七整株洗净切碎后按w/v为1∶2的比例加入去离子水于榨汁机中榨汁，将所得三七汁液用四层纱布过滤后用含0.02％CaCO3的去离子水稀释至含三七汁10％～50％(v/v)，分装后以0.103MPa、121℃、高压蒸气灭菌20min。该培养基原材料容易获取，培养基的制作和游动孢子产生的程序简单易学，大大提高了恶疫霉菌游动孢子产生的效率，为病原菌接种体的制备提供了极大的便利。
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公开(公告)号：CN102634509B
公开(公告)日：2014-04-16
申请号：CN201210126926.6
申请日：2012-04-27
申请人： 云南农业大学
IPC分类号： C12N15/10
摘要： 本发明公开了一种直接从感病小麦叶片上高效快速提取小麦条锈菌DNA的方法，其特征在于，吸取20μl配好的20％的chelex-100混悬液于100μl PCR管中，吸取5μl的Chelex-100上清液于长有小麦条锈菌夏孢子小麦叶片上，并在滴有Chelex-100上清液的病斑处反复涂抹叶片多次，将锈孢子洗下后，吸回叶片上含有锈孢子的Chelex-100上清液并加入到装有20μl 20％chelex-100混悬液的PCR管中，用移液器反复吸取混匀，放入沸水浴中水浴2min，再放到旋涡混合器上振荡混匀10s，水浴5min后保存于-20℃备用，上清液均可作为PCR的模板。建立一套高效、快速、可直接从感小麦条锈病菌的植株上提取小麦条锈病菌DNA作为PCR扩增模板的方法。
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