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公开(公告)号：CN116240188A
公开(公告)日：2023-06-09
申请号：CN202111494334.5
申请日：2021-12-08
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明涉及一种热稳定性提高的二氢蝶酸合成酶突变体的制备方法。所述制备方法包括获得受体蛋白‑DHPPP晶体复合物与SMM作用的氨基酸位点；对配体以内的氨基酸分别进行热稳定性和亲和力的单点突变；获得受体蛋白热稳定性的关键氨基酸；通过软件模拟关键氨基酸突变前后的稳定力及亲和力确定突变氨基氨酸；基于所述突变氨基酸，构建热稳定性受体蛋白的氨基酸序列。结合生物学实验结果显示，利用本发明提供的制备方法获得的受体蛋白突变体，其热稳定性得到提高，为受体蛋白热稳定性的改造提供理论依据。
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公开(公告)号：CN113968804B
公开(公告)日：2022-12-02
申请号：CN202010710937.3
申请日：2020-07-22
Applicant: 中国农业大学
IPC: C07C317/44 , C07C315/02 , C07K14/765 , C07K14/77 , C07K14/795 , C07K16/44 , G01N33/52 , G01N33/53 , G01N33/543 , G01N33/577
Abstract: 本发明公开了一种莫奈太尔砜的半抗原、人工抗原及其制备方法与应用。所述莫奈太尔砜半抗原的结构式如式I所示，可按照下述方法制备：在冰醋酸中，采用氧化氢氧氧化对三氟甲硫基苯甲酸即得。本发明提供了莫奈太尔砜半抗原及人工抗原，为高灵敏度抗莫奈太尔砜抗体的制备奠定基础；最终，筛选获得性质最优抗体，效价最高可达4×104，灵敏度为2.6μg/L。本发明所提供的莫奈太尔砜半抗原及人工抗原的合成方法简单高效，所需化学试剂价格低廉，获得的抗体灵敏度高，完全可用于免疫分析中，在兽药残留检测中具有重要意义。
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公开(公告)号：CN115353567A
公开(公告)日：2022-11-18
申请号：CN202211015327.7
申请日：2022-08-23
Applicant: 中国农业大学
IPC: C07K16/44 , C12N5/078 , C12N5/09 , C12N5/20 , C12N15/02 , C12N13/00 , G01N33/577 , G01N33/53 , G01N33/558 , G01N33/543
Abstract: 本发明提供一种基于细胞分选与微流控电融合技术的单克隆抗体制备方法，包括：1)针对特定化合物，设计人工抗原；2)用人工抗原免疫实验动物，分离淋巴细胞；3)用免疫磁珠法对淋巴细胞进行分选，获得稀有浆细胞；4)将分选的稀有浆细胞与骨髓瘤细胞混合，采用微流控电融合芯片进行细胞融合，从融合细胞中筛选出分泌抗该化合物的单克隆抗体的杂交瘤细胞。本方法操作简单，为高性能单克隆抗体的精准制备奠定基础，在科研与实际生产中具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN115327105A
公开(公告)日：2022-11-11
申请号：CN202210980177.7
申请日：2022-08-16
Applicant: 中国农业大学
IPC: G01N33/543 , G01N33/58 , G01N33/53 , G01N33/535 , G01N33/577
Abstract: 本发明公开了一种基于Pd@Pt纳米酶直接标记一抗的一步法ELISA检测小分子化学污染物的方法。它包括如下步骤：将靶标小分子物质全抗原包被到酶标板上；包被后加入封闭液；向封闭后的酶标板中分别加入待检样品溶液和靶标小分子物质标准品溶液，然后均加入Pd@Pt纳米酶免疫探针，发生竞争性免疫反应；然后加入底物显色，显色完毕后终止免疫反应；测定显色后溶液的吸光度值，以靶标小分子物质标准品溶液浓度的对数形式为横坐标、以吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，根据待检样品溶液经显色后溶液的吸光度值和标准曲线计算，即可得到待检样品溶液中靶标小分子物质的含量。本发明能实现对靶标小分子污染物高灵敏、高特异、高通量的一步法快速检测。
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公开(公告)号：CN114487404A
公开(公告)日：2022-05-13
申请号：CN202111630811.6
申请日：2021-12-28
Applicant: 中国农业大学
IPC: G01N33/573 , G01N33/569 , G01N33/558
Abstract: 本发明公开了用于检测细菌内碳青霉烯酶的免疫层析试纸条及检测方法。用于检测细菌内碳青霉烯酶的免疫层析试纸条，包括依次粘贴在底板上的样品垫、NC膜、吸水垫和底板，其中NC膜上设有检测线和质控线，检测线包被有青霉素‑BSA，质控线包被有His融合标签抗体。本发明还提供用于检测细菌内碳青霉烯酶的试剂盒，包括细菌裂解液、反应孔I、II和所述试纸条；反应孔I包被有美罗培南，反应孔II包被有胶体金标记的PBP 4’受体蛋白复合物。本发明选用性质稳定的美罗培南作为底物，以金标青霉素结合蛋白PBP 4’作为受体，通过检测底物消耗情况间接检测样品中碳青霉烯酶的有无。为细菌内碳青霉烯酶的快速检测提供有力技术手段。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114134163A
公开(公告)日：2022-03-04
申请号：CN202111306352.6
申请日：2021-11-05
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明公开了单个抗原特异性转基因杂交瘤细胞筛选方法，通过制备表达EGF‑R‑AVI‑tag融合蛋白的转基因Sp2/0骨髓瘤细胞，结合传统杂交瘤技术的脾细胞融合技术，获得可在细胞膜展示分泌型特异性抗体的转基因杂交瘤细胞，并利用单细胞分选系统实现对单个特异性转基因杂交瘤细胞的筛选。本发明基于转基因技术，提供一种精准、高通量的转基因杂交瘤单克隆抗体生产平台。与传统杂交瘤技术相比，显著缩短了单个抗原特异性杂交瘤细胞的制备时间和成本，提高了单细胞率和阳性率，且制备的单克隆抗体的效价和亲和力也显著提高。本发明提供的转基因杂交瘤抗体制备技术可用于制备高特异性、高灵敏度和高稳定性稀有单克隆抗体，应用前景广阔。
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公开(公告)号：CN114014935A
公开(公告)日：2022-02-08
申请号：CN202111416006.3
申请日：2021-11-25
Applicant: 中国农业大学
IPC: C07K16/44 , C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/866 , C12N5/10 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开了抗磺胺类药物纳米抗体与大豆过氧化物酶的融合蛋白及应用。本发明将通过噬菌体展示技术获得的抗磺胺类药物纳米抗体基因与大豆过氧化物酶基因优化后连接，并利用昆虫细胞杆状病毒表达系统对其进行融合表达。产生的融合蛋白具有与磺胺类药物的结合活性和过氧化氢酶的催化活性，该融合蛋白用于以免疫标记技术为基础的酶联免疫分析检测，其IC50值为1.21ng/mL，线性检测范围为0.27‑5.34ng/mL。该融合蛋白具有耐高温、耐有机溶剂、易生产等特性，基于该融合蛋白的检测方法具有快速、灵敏、稳定的优势。本发明对于磺胺类药物的低成本、大批量样品的残留现场检测具有重要意义。
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公开(公告)号：CN113968865A
公开(公告)日：2022-01-25
申请号：CN202010714570.2
申请日：2020-07-22
Applicant: 中国农业大学
IPC: C07D491/18 , C07K14/765 , C07K14/77 , C07K14/795 , C07K1/107 , C07K16/44 , G01N33/577
Abstract: 本发明公开了一种倒千里光碱的半抗原、人工抗原及其制备方法与应用。所述倒千里光碱的半抗原的结构式如式I所示，可按照下述方法制备得到：在4‑二甲氨基吡啶的催化下，倒千里光碱与琥珀酸酐进行反应即得。采用活泼酯法将载体蛋白偶联于半抗原的羧基碳上得到所述倒千里光碱人工抗原。本发明还提供了一种倒千里光碱的单克隆抗体，通过所述倒千里光碱人工抗原免疫实验动物，经过细胞融合、筛选和体外诱生得到。所述倒千里光碱的单克隆抗体可用于制备倒千里光碱检测试剂或试剂盒。本发明在食品安全检测中具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN113968818A
公开(公告)日：2022-01-25
申请号：CN202010710938.8
申请日：2020-07-22
Applicant: 中国农业大学
IPC: C07D221/22 , C07K14/765 , C07K14/77 , C07K1/107 , C07K16/44 , G01N33/577
Abstract: 本发明公开了一种10‑羟基新乌头碱半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法与应用。10‑羟基新乌头碱半抗原的结构式如式Ⅰ所示，可按照下述方法制备：以吡啶作为溶剂，10‑羟基新乌头碱和丁二酸酐进行反应。本发明还提供了10‑羟基新乌头碱的单克隆抗体，通过10‑羟基新乌头碱的人工抗原免疫实验动物，产生抗血清，通过ELISA筛选出分泌抗10‑羟基新乌头碱单克隆抗体的杂交瘤细胞，制备得到10‑羟基新乌头碱单克隆抗体，该抗体的灵敏度高且具有广谱性，可交叉识别乌头类生物碱。基于本发明提供的广谱特异性抗体可用于建立乌头类生物碱的酶联免疫、化学发光、时间分辨、荧光偏振等免疫学检测方法，并可制备乌头生物碱的试剂盒检测产品，适用于大量样品检测及现场快速检测。
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公开(公告)号：CN113968804A
公开(公告)日：2022-01-25
申请号：CN202010710937.3
申请日：2020-07-22
Applicant: 中国农业大学
IPC: C07C317/44 , C07C315/02 , C07K14/765 , C07K14/77 , C07K14/795 , C07K16/44 , G01N33/52 , G01N33/53 , G01N33/543 , G01N33/577
Abstract: 本发明公开了一种莫奈太尔砜的半抗原、人工抗原及其制备方法与应用。所述莫奈太尔砜半抗原的结构式如式I所示，可按照下述方法制备：在冰醋酸中，采用氧化氢氧氧化对三氟甲硫基苯甲酸即得。本发明提供了莫奈太尔砜半抗原及人工抗原，为高灵敏度抗莫奈太尔砜抗体的制备奠定基础；最终，筛选获得性质最优抗体，效价最高可达4×104，灵敏度为2.6μg/L。本发明所提供的莫奈太尔砜半抗原及人工抗原的合成方法简单高效，所需化学试剂价格低廉，获得的抗体灵敏度高，完全可用于免疫分析中，在兽药残留检测中具有重要意义。
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